论文部分内容阅读
青大医学院98级病原生物学专业 硕士研究生 王 静 导 师 王 斌 教授 目的 研究与系统性红斑狼疮（SLE）及胰岛素依赖型糖尿病（IDDM）相关的新的Th1/Th2细胞因子编码基因。方法 采集活动期SLE和IDDM患者及正常人全血标本各1例，分离其外周血单个核细胞（PBMC），提取总RNA，用3’端锚定引物和5’端随机引物进行mRNA差异显示反转录聚合酶链反应（DDRT-PCR），扩增PBMC中Th1/Th2细胞因子相关基因片段，DDRT-PCR扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，用银染方法显示差异表达的cDNA 条带共7条，分别命名为WJ1~WJ7。选择性地从凝胶中回收WJ2和WJ4差异条带并进行再扩增，再扩增产物纯化后与pGEM-T Easy载体连接，克隆于大肠杆菌DH5α中，通过蓝白斑选择及酶切鉴定筛选出阳性克隆，提取重组质粒进行序列测定。将所得序列通过Internet 与GenBank、EMBL及DDBJ DNA数据库中已知核苷酸序列进行同源性分析。结果 取自IDDM 患者WJ2片段全长380bp，其核苷酸序列与IL-2的同源性为56.7%；取自SLE患者WJ4片段全长122bp，其核苷酸序列与IL-4的同源性为59.3%。两个片段在正常人中均未见表达；WJ2片段在SLE患者中表达极弱；WJ4片段在IDDM中未见表达。结论 WJ2及WJ4基因片段可能为两个代表新基因的EST（expressed sequence tag）序列。差异表达序列的分析可为新的Th1/Th2细胞因子相关基因的发现提供一些有价值的线索。<WP=4>本课题受山东省自然科学基金重大项目（编号Z99C02）的资助