漆酶介体体系的研究和应用 ——小分子天然介体挖掘和血红蛋白介体效应

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:Lassie01
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真菌能够通过分泌漆酶降解木质素,并从中获取碳源,然而纯化后的真菌漆酶降解木质素的能力却极低。一些小分子介体,如ABTS、HBT及TEMPO等,能够介导漆酶催化氧化反应,提升漆酶的催化能力。但这些介体具有环境成本高、催化过程中易产生毒性物质等缺点,因此寻找性质稳定、成本低廉、毒性较低的漆酶介体一直是环境保护和生物质能源的研究热点之一。本论文首先利用萃取方法提取杏鲍菇内可溶性化合物,通过快速漆酶介体体系(laccase-mediator system,LMS)动力学实验确定其对漆酶催化氧化反应的促进或抑制能力,进一步利用HPLC-MS和代谢组学差异分析的方法从最高活性萃取液的柱层析组分中挖掘潜在的活性成分。结果表明,杏鲍菇栽培料中可能含有活性漆酶介体成分;生物信息学XCMS代谢产物组分析揭示,介体活性最高的CET05分离组分中富含的代谢产物,涉及到软木脂单体合成、香豆素合成、丁香油酚或异丁香油酚合成等代谢途径。最后讨论了11种潜在的天然介体分子物理化学性质,其中4种为已有文献报道的天然介体分子。虽然对小分子介体在LMS体系中的作用和功能已有了较深的认识,对于漆酶与具有血红素的蛋白质在木质素酶系中的协同作用,我们尚不清楚。因此,本论文通过紫外可见光谱、等温滴定量热法、凝胶渗透色谱、拉曼光谱、2D-NMR和HPLC-MS等实验手段,表征漆酶和漆酶-血红蛋白催化体系对木质素结构变化的影响。结果发现,血红蛋白不仅与木质素存在物理的相互作用,而且能够改变漆酶催化氧化木质素的产物谱,表明血红蛋白在反应中具有蛋白质络合、底物吸收、氧气运输和过氧化物歧化等作用。最后,我们检测了漆酶和漆酶-血红蛋白体系降解酚类、苯胺等多类化合物的反应速率,证实了漆酶-血红蛋白体系在污染物治理中的潜在可能性。
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