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由疫霉菌侵染引起的作物疫病是农业生产上的重要病害,该病害具有蔓延速度快、易爆发成灾与防治困难等特点,导致我国马铃薯、大豆、蔬菜和果树等作物的直接经济损失高达数百亿元,因此建立作物疫霉菌快速准确检测方法,对于该病害的早期诊断和及时防控至关重要,也是保证农作物品质和产量的重要技术手段。相较于以环介导等温扩增(LAMP)为主的核酸恒温扩增技术,重组酶聚合酶恒温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)与侧流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)结合应用形成的LFD-RPA体系能实现检测结果肉眼直接判定。本研究以致病疫霉(Phytophthora infestans)、芋疫霉(Phytophthora colocasiae)及荔枝霜疫霉(Peronophythora litchii)这三种农业生产上重要的疫霉菌为试验对象,旨在建立这三种疫霉菌特异的LFD-RPA快速检测体系并优化。主要研究内容及结果如下:1.基于LFD-RPA技术的致病疫霉检测方法的建立与评价。本研究针对致病疫霉的特异序列初步设计筛选引物,得到针对三磷酸鸟苷结合蛋白基因序列(GTP-blinding protein gene,Ypt1)的最佳引物(Pi LFD-RPA-F/R)和探针(Pi LFD-RPA-P),建立致病疫霉LFD-RPA检测体系。再对该体系扩增时间和扩增温度进一步优化,结果表明,侧流纸层析试纸条的检测带有深色清晰条带的最短扩增时间为15min,最低扩增温度为34℃。在体系灵敏度试验中,50μl的反应体系,可检测到的最低模板DNA浓度为1pg/μl。2.基于LFD-RPA技术的芋疫霉检测方法的建立与评价。本研究针对芋疫霉的特异序列初步设计筛选引物,得到针对三磷酸鸟苷结合蛋白基因序列(GTP-blinding protein gene,Ypt1)的最佳引物(Pco LFD-RPA-F/R)和探针(Pco LFD-RPA-P),建立芋疫霉LFD-RPA检测体系。再对该体系扩增时间和扩增温度进一步优化,结果表明,侧流纸层析试纸条的检测带有深色清晰条带的最短扩增时间为20min,最低扩增温度为34℃。在体系灵敏度试验中,50μl的反应体系,可检测到的最低模板DNA浓度为1pg/μl。3.基于LFD-RPA技术的荔枝霜疫霉检测方法的建立与评价。本研究针对荔枝霜疫霉的特异序列初步设计筛选引物,得到针对Rh型铵盐转运子基因为靶序列的最佳特异性引物(Pl LFD-RPA-F/R)和探针(Pl LFD-RPA-P),建立荔枝霜疫霉LFD-RPA检测体系。再对该体系扩增时间和扩增温度进一步优化,结果表明,侧流纸层析试纸条的检测带有深色清晰条带的最短扩增时间为20min,最低扩增温度为34℃。在体系灵敏度试验中,50μl的反应体系,可检测到的最低模板DNA浓度为10pg/μl。综上,本研究为致病疫霉、芋疫霉及荔枝霜疫霉的快速鉴定和早期诊断提供了新的检测方法,该方法具有特异性强,灵敏度高,反应耗时短,可利用恒温进行扩增,反应结果肉眼可见和实用性强等优势,为田间快速检测鉴定病原体提供了有效手段。