【摘 要】
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目的:缺血性脑卒中时细胞凋亡是参与神经损伤的主要机制,而缺血区细胞凋亡和自噬相互作用加重神经损伤,因此本研究将探讨岩藻多糖（Fucoidan,FU）对缺氧缺糖/再灌注损伤（OGD/RP）诱导的神经元细胞增殖、凋亡、自噬和JAK/STAT信号通路的影响,明确FU减轻脑缺血再灌注损伤的可能分子机制,对开发抗缺血性损伤的新药具有重要意义。方法:本研究以大鼠神经元PC12细胞为研究对象,通过三气培养箱和无
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目的:缺血性脑卒中时细胞凋亡是参与神经损伤的主要机制,而缺血区细胞凋亡和自噬相互作用加重神经损伤,因此本研究将探讨岩藻多糖（Fucoidan,FU）对缺氧缺糖/再灌注损伤（OGD/RP）诱导的神经元细胞增殖、凋亡、自噬和JAK/STAT信号通路的影响,明确FU减轻脑缺血再灌注损伤的可能分子机制,对开发抗缺血性损伤的新药具有重要意义。方法:本研究以大鼠神经元PC12细胞为研究对象,通过三气培养箱和无葡萄糖的培养基建立OGD/RP细胞损伤模型。为明确FU在调节PC12细胞自噬和凋亡时对JAK/STAT信号通路的作用,我们通过采用JAK/STAT信号通路抑制剂WP1066对其通路进行干预。实验分为对照组（Control）、OGD/RP组、OGD/RP+1μM FU组、OGD/RP+1μM FU+10μM WP1066（JAK/STAT抑制剂）组。采用CCK-8实验检测PC12细胞活力;采用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡情况、ROS水平以及线粒体膜电位情况;免疫荧光检测线粒体中LC3表达;透射电镜观察线粒体中自噬小体;采用ELISA法分析PC12细胞培养上清液中抗氧化蛋白SOD、GSH-Px水平;采用Western blot法分析PC12细胞凋亡水平、自噬情况以及JAK/STAT信号通路相关蛋白的表达水平。结果:OGD/RP处理能明显抑制PC12细胞增殖,经1μM FU处理能缓解OGD/RP对细胞增殖的抑制。OGD/RP组的细胞凋亡率、ROS量、线粒体膜电位相较于正常组明显增加,FU处理组相较于正常组则显著降低。而且,通过Western blot法证实FU处理导致Bax、Cleaved-caspase3、LC3 I/II蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量增加。此外,经FU和OGD/RP处理后,与单独OGD/RP处理相比,p-JAK2和p-STAT3表达明显下调。WP1066抑制剂能进一步下调FU和OGD/RP作用下的JAK2和STST3蛋白磷酸化水平。结论:FU通过抑制JAK2/STAT3信号通路来保护神经元免受OGD/RP引起的氧化损伤和细胞凋亡。
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