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疯草是豆科黄芪属和棘豆属有毒植物的总称,也是世界范围内危害草原畜牧业最严重的一类毒草。在我国,疯草广泛分布于西北、华北和西南的广大草原,危害面积达1100万hm~2。苦马豆素是疯草主要毒性成分之一。随着对疯草化学成分以及防除利用等方面研究的深入,需要改进苦马豆素现有提取方法,提取大量的苦马豆素,同时需要对苦马豆素的微量定量检测方法进行研究,以满足进一步对动物中毒机理以及防制措施研究的需要。本研究首先对40 KHz的超声波提取方法做了改进,提高疯草中苦马豆素的提取效率。建立了苦马豆素气相色谱内标法定量检测方法,优化了a-甘露糖苷酶法,使苦马豆素微量定量检测方法更实用,更容易操作。1.将变异黄芪草粉1.0 kg加水,用40 KHz超声波清洗器处理。水提液浓缩除杂后,先用正丁醇萃取除杂,下部水提浓缩液用碱性正丁醇萃取,后用稀酸水萃取。浓缩后的稀酸水萃取液用氨性氯仿萃取,浓缩萃取液成浸膏,此浸膏经石蜡油浴升华得到水提液浓缩28 mg白色晶体,初步鉴定为苦马豆素,提取率为28 mg/kg。2.在检测器温度280℃,进样口温度300℃,柱温温度230℃。分流比为60∶1;载气为高纯氮气;载气压力为200 kPa,进样量:1uL的色谱条件下,用甲基-a-D-吡喃甘露糖苷(me-Gal)为内标,进行气相色谱分析,以SW进样质量浓度Y对SW和me-Gal峰面积比值X进行回归分析,得回归方程:Y=0.198 3X-0.069 5,r =0.999 4,表明SW进样质量浓度(0.047～6 mg/mL)对SW和me-Gal峰面积比值线性关系良好,对于疯草样品利用超声波协助提取法和732阳离子树脂法处理,通过对其结果分析能发现超声波协助提取法对与苦马豆素的提取过程损失少。3.每个微孔中依次加100μL柠檬酸盐缓冲溶液,20μL a-甘露糖苷酶稀释液,20μL待检测的溶液后,37℃孵育15 min,每个微孔中加20μL对硝基苯基-α-D-甘露糖苷溶液,37℃孵育90 min后在405 nm滤光片下测吸光度,以SW浓度Y对其吸光度X(空白对照-其平均数)进行回归分析,得回归方程:Y=-0.0135X +0.1613,r =0.996 4,表明SW进样量在0.05～1.25 mg/mL范围内线性关系良好。4.运用超声波协助提取法处理不同生长周期的茎直黄芪和黄花棘豆,利用气相色谱内标法测定其苦马豆素含量,结果显示苦马豆素含量盛花期>结荚期>现蕾期>分枝期。