山西中部地区鸡源空肠弯曲菌的分离鉴定、耐药分析、MLST分型及毒力基因检测

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为了了解山西中部地区鸡源空肠弯曲菌的流行情况、耐药性以及毒力基因的数据信息,本研究建立弯曲菌属和空肠弯曲菌的双重PCR检测方法,分别对中国山西省的吕梁、太原、晋中和阳泉四个地区的6个肉鸡养殖场采集的鸡泄殖腔拭子,进行空肠弯曲菌的分离鉴定;通过纸片扩散法对分离的空肠弯曲菌菌株进行耐药性检测;通过多位点序列分型的方法对分离的空肠弯曲菌的群体结构进行研究,并对不同地区养殖场和不同物种之间的遗传进化关系进行调查分析;通过PCR方法,对空肠弯曲菌相关的6个毒力基因的携带情况进行调查。试验结果表明:1.弯曲菌属和空肠弯曲菌双重PCR方法的最佳引物浓度为0.5μmol/L,最佳退火温度为56.4℃,灵敏度试验的最低检测限为89.9 pg/μL。2.本试验采集了324份肉鸡泄殖腔拭子样品,其中35份鉴定为空肠弯曲菌阳性株,感染率为10.8%(35/324)。统计分析显示晋中采集肉鸡养殖场分离率最高为18.0%(28/153),显著的高于吕梁采集肉鸡养殖场的3.7%(2/54)和阳泉采集肉鸡养殖场的2.8%(2/72)的分离率(p<0.05),太原采集肉鸡养殖场的分离率为6.7%(3/45),与其他地区肉鸡养殖场无显著差异(p>0.05)。3.药敏结果显示,分离株对氨苄西林的耐药率最高为85.7%,其次诺氟沙星、萘啶酸和头孢噻肟耐药率有80.0%,环丙沙星77.1%、左氧氟沙星71.4%和四环素68.6%,对克林霉素和庆大霉素的耐药率低,分别为34.3%和20.0%,红霉素的耐药率最低只有14.3%。分离株的多重耐药比例达到88.6%,其中AMP-NOR-CIP-LEV-TET-NAL-CTX模式占28.6%,为空肠弯曲菌的主要耐药模式。4.本试验共鉴定出15个不同的序列型,属于6个克隆复合体和7个单株,发现了9个新的序列型;最常见的序列型是2274,分离率为20.0%,最多的克隆复合体是ST-354,分离率为14.3%。相同序列型的菌株来源于同一个地区肉鸡养殖场,不同地区肉鸡养殖场分离株具有独特的序列型,少数序列型在不同地区的肉鸡养殖场呈交叉分布;遗传进化分析结果显示,同一地区肉鸡养殖场的分离株大多遗传距离近,并且发现本试验分离株与国内外分离株之间关系密切,有8个序列型分别与国内外鸡源和腹泻病人序列型遗传距离近。5.黏附定植基因cad F存在于所有分离株中,其次毒素调节基因cdt B和热休克蛋白基因dna J的分离率占97.1%;此外,鞭毛蛋白基因fla A和趋化基因che Y也高达94.3%;最少的是侵袭相关基因cia B只有51.4%。几个不同地区肉鸡养殖场之间的毒力基因携带率没有显著差异。综上所述,从山西中部地区6个肉鸡养殖场采集的空肠弯曲菌的感染率存在差异,总体阳性率低于全国其他地区流行情况。对喹诺酮类和β-内酰胺类药物的耐药性高且多重耐药现象普遍;分离株基因型具有遗传多样性,且有5种毒力相关基因在空肠弯曲菌中携带率高。
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