【摘 要】
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本实验旨在研究加减异功散颗粒对老年脾虚犬肠道菌群以及肠道上皮黏膜屏障功能的影响。采集老年脾虚犬粪样,经涡旋、过滤、离心、扩增后得到犬粪菌孵育液,建立体外胃肠模拟体系,体外模拟加减异功散胃肠物理、化学消化与微生物代谢。利用16S r DNA测序法,检测模拟体系菌群的多样性与结构变化。取胃肠模拟产物,经乙酸乙酯萃取、减压蒸发、冷冻干燥、DMSO溶解,过滤膜,用于肠黏膜屏障功能研究。建立Caco-2肠上
【基金项目】
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山西省基础研究项目； 山西省博士科研启动基金[资助项目编号2020BKS01]； 山西中医药大学博士科研启动基金[资助号 20170101]； 山西省重点研发计划[批准号201903D221013]；
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本实验旨在研究加减异功散颗粒对老年脾虚犬肠道菌群以及肠道上皮黏膜屏障功能的影响。采集老年脾虚犬粪样,经涡旋、过滤、离心、扩增后得到犬粪菌孵育液,建立体外胃肠模拟体系,体外模拟加减异功散胃肠物理、化学消化与微生物代谢。利用16S r DNA测序法,检测模拟体系菌群的多样性与结构变化。取胃肠模拟产物,经乙酸乙酯萃取、减压蒸发、冷冻干燥、DMSO溶解,过滤膜,用于肠黏膜屏障功能研究。建立Caco-2肠上皮黏膜屏障模型,利用LPS对Caco-2细胞进行炎性损伤,细胞实验分四组,空白组、给药组、致炎自复组、致炎给药组。致炎24h后进行荧光素钠通透性测定,RT-PCR检测Claudin-1、Occludin与ZO-1 m RNA的相对表达量。实验结果表明,加减异功散能显著增加肠道菌群chao1指数与shannon指数（P＜0.05）,显著增加厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门的丰度（P＜0.05）,显著降低变形菌门的丰度（P＜0.05）,而对梭杆菌门无显著变化（P＞0.05）。另外,加减异功散能显著降低厚壁菌门与拟杆菌门比值。在属水平,加减异功散能显著增加布劳特氏菌属、柯林斯菌属、瘤胃球菌属相对丰度（P＜0.05）,显著降低大肠杆菌-志贺氏菌属、柠檬酸杆菌属丰度（P＜0.05）。加减异功散能显著降低Caco-2细胞黏膜荧光素钠通透性,同时促进Caco-2细胞Claudin-1、Occludin与ZO-1 m RNA表达,并且能减小Claudin-1与Occludin m RNA表达量比值。综上所述,加减异功散可显著提高脾虚犬肠道菌群多样性,并改善肠道菌群结构,该结果提示,加减异功散有望用于老年犬脾胃虚弱的预防与治疗。
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