目的：　　 分别建立检测人细小病毒B19、人博卡病毒(HBoV)及人细小病毒4/5型（PARV4/5）感染的巢式PCR方法，优化评价后应用于检测中国西南及东南地区不同人群血清样本中的人细小病毒感染，并对感染情况进行流行病学统计分析，以探讨其感染与乙肝疾病的相关性，为上述人细小病毒感染相关疾病的诊治与防控提供科学依据与手段。　　 方法：　　 1.巢式PCR检测方法的建立应用构建的标准品质粒（B19、HBoV及PARV4/5）作为PCR模板，分析检测方法的灵敏性;以常见的其它DNA病毒核酸作为PCR模板，分析检测方法的特异性。优化PCR反应体系及条件，分别建立检测人细小病毒B19、HBoV及PARV4/5的巢式PCR方法，三种巢式PCR方法特异性好，检测灵敏度均可达每个反应10个拷贝。　　 2.应用已建立的巢式PCR方法检测中国不同地区人群血清标本中的人细小病毒收集中国西南及东南地区的乙肝患者、健康成人及健康儿童血清标本，采用病毒核酸提取试剂盒提取病毒DNA，应用已建立的巢式PCR方法检测B19、HBoV及PARV4/5，检测结果应用琼脂糖凝胶电泳法鉴定，阳性样本进行PCR产物回收、测序，结果与GenBank中各病毒的参比株、流行株序列比对，确定检测结果为目的核酸DNA。　　 3.检测结果分析方法不同地区三种病毒的检出率、病毒感染人群的年龄、性别差异等统计学分析方法采用SPSS17.0、GraphPadPrism5软件。两组间阳性率比较采用四格表资料的卡方检验，多组间阳性率比较采用RXC表资料的卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。　　 结果：　　 1.中国西南地区人细小病毒感染情况382例西南地区（包括西藏125例、四川169例、云南52例、贵州36例）乙肝患者血清标本中，三种人细小病毒检出率依次为B19(3.9％)、HBoV(0.8％)、PARV4/5(3.7％)。其中四个省份乙肝患者血清中三种病毒检出率比较，西藏地区PARV4/5阳性率(9.6％)高于四川(0.6％)、云南(1.9％)、贵州(0％)三个省份，而四个省份中B19及HBoV检出率无明显的统计学差异。　　 四川地区的184份健康成人对照血清标本中，三种人细小病毒检出率依次为B19(4.3％)、HBoV(3.3％)、PARV4/5(3.8％)。与上述的四川地区169份成人乙肝患者比较，差异无统计学意义。同样，与四川地区的175份健康儿童血清标本中检出率B19(9.1％)、HBoV(4.6％)、PARV4/5(4.0％)相比较，差异也无统计学意义。　　 西南地区收集的血清样本中，三种人细小病毒感染在性别、年龄分布上差异均无统计学意义。在乙肝患者中，乙肝携带者组（HBsAg+HBeAg-）与慢性乙肝患者组（HBsAg+HBeAg+）三种细小病毒检出率相比较，差异也无统计学意义。　　 2.中国东南地区人细小病毒感染情况江苏地区收集的95份成人肝病患者（乙肝患者71份）血清标本中，三种人细小病毒检出率依次为B19(2.1％)、HBoV(9.5％)、PARV4/5(0％)。浙江地区收集的263份成人乙肝患者血清标本中，三种病毒检出率依次为B19(0.8％)、HBoV(0.4％)、PARV4/5(0.8％)。两个地区乙肝患者血清标本中三种病毒的检出率比较，江苏地区HBoV阳性率7.0％(5/71)明显高于浙江地区0.4％(1/263)，差异有统计学意义（P＜0.05），而B19与PARV4/5阳性率无统计学差异。　　 浙江地区355份健康成人对照血清标本中，三种病毒检出率依次为B19(2.8％)、HBoV(7.3％)、PARV4/5(2.5％)，与上述浙江地区263份成人乙肝患者比较，健康成人血清中HBoV阳性率明显高于乙肝患者，差异有统计学意义（P＜0.05），而B19与PARV4/5阳性率无统计学差异。浙江地区355份健康成人与172份健康儿童血清标本中B19(2.3％)、HBoV(4.7％)、PARV4/5(1.2％)相比较，差异无统计学意义。　　 东南地区收集血清样本中，除355例健康成人对照组中，HBoV在男性中的阳性率高于女性，差异有统计学意义(P＜0.05)外，三种人细小病毒感染在性别、年龄分布上差异均无统计学意义。乙肝携带者组(HBsAg+HBeAg-)与慢性乙肝患者组（HBsAg+HBeAg+）三种细小病毒检出率相比较，差异无统计学意义。　　 3.中国西南地区与东南地区人细小病毒感染情况比较西南地区566份成人血清标本中三种病毒的检出率依次为B19(4.1％)、HBoV(1.6％)、PARV4/5(3.7％);东南地区713份成人血清标本三种病毒的检出率依次为B19(2％)、HBoV(5％)、PARV4/5(1.5％)。西南地区成人B19与PARV4/5的感染率均高于东南地区，而东南地区成人HBoV感染率高于西南地区，差异均有统计学意义(P＜0.05)。　　 西南地区175份健康儿童血清标本中三种病毒检出率B19(9.1％)、HBoV(4.6％)、PARV4/5(4.0％)与东南地区172份健康儿童血清中的B19(2.3％)、HBoV(4.7％)、PARV4/5(1.2％)比较，西南地区B19阳性率高于东南地区，差异有统计学意义(P＜0.05)。　　 4.总的血清样本中B19、HBoV及PARV4/5感染率及三种病毒合并感染情况在收集的总计1626例血清样本中，B19阳性57例(3.5％)，HBoV阳性61例(3.8％)，PARV4/5阳性41例(2.5％)。在159例阳性样本中，3种病毒B19、HBoV、PARV4/5至少有2种病毒合并感染者16例，占样本总数的0.98％(16/1626)。其中儿童8例，占儿童总样本数的2.3％(8/347);成人8例，占成人总样本数的0.63％(8/1279)。　　 结论：　　 中国部分地区人群中普遍存在人细小病毒B19、HBoV及PARV4/5感染，西南地区与东南地区感染率有所差异，B19、HBoV及PARV4/5感染在性别及年龄分布上无明显差异，三种人细小病毒感染与乙肝疾病无显著相关性。