论文部分内容阅读
背景:特发性肺纤维化（IPF）是寻常型间质性肺炎最常见的一种类型，约占41%-71%。病变局限于肺部，主要以弥漫性的肺泡炎症、肺泡结构紊乱为主要病理表现，最终可导致肺纤维化，从而造成肺功能损害和呼吸困难。肺纤维化主要发生在间质性肺炎、结缔组织疾病引起的肺部并发症以及急性呼吸窘迫综合症等疾病中，往往提示疾病预后不良。发病率逐年递增，患者中位生存时间为2～5年，5年生存率更是低于50％，最重要的是，肺纤维化患者目前对常规治疗反应较差，骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，在受损伤肺中，可分化为肺泡上皮细胞及血管内皮细胞，有助于损伤修复，生存素是凋亡抑制基因家族成员之一，能在体内体外抑制细胞凋亡，本文就携带GFP及survivin基因并经慢病毒转染的BMSC对肺纤维化的作用进行初步探讨。目的：研究经尾静脉移植携带生存素(survivin)基因的骨髓间充质干细胞(BMSC)对小鼠肺纤维化的影响。方法：体外构建培养经慢病毒GFP转染并携带生存素基因的C57BL/6小鼠BMSC-survivin以及经慢病毒GFP转染的C57BL/6小鼠BMSC，并应用流式细胞术比较两种细胞的体外凋亡率。6-8周龄C57BL/6小鼠48只，随机分为3组，BMSC-survivin (A)，BMSC组(B)，模型组(C)；博莱霉素5mg/kg气管内灌注制备小鼠肺纤维化模型。造模24h后，分别经尾静脉给予如下处理：A组注射BMSC-survivin, B组注射BMSC，C组注射生理盐水。分别于第7、28天各处死8只[1]。收集肺组织作病理学检查；免疫组织化学法检测肺表面蛋白A（surfaceprotein A，SP-A）的表达；ELISA法测定血清中羟脯氨酸Hyp的含量；PCR法检测转化生长因子(transforming growth factor β1,TGF-β1)和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases9, MMP-9)的mRNA表达情况。结果： BMSC及BMSC-survivin细胞凋亡率分别为(14.466±1.953)%和(7.718±0.493)%，给予BMSC干预的小鼠肺组织病理改变较对照组轻，A、B、C组血清羟脯氨酸含量在第7天分别为(0.106±0.012)ug/ml、（0.245±0.009）ug/ml和（0.324±0.002）ug/ml，第28天分别为（0.457±0.006）ug/ml、（0.752±0.012）ug/ml和（1.372±0.035）ug/ml；A、B、C组肺组织SP-A表达第7天含量分别为0.718±0.018、0.669±0.013和0.581±0.027，第28天分别为0.433±0.012、0.372±0.039和0.277±0.013；各时间段中，A组TGF-β1mRNA、MMP-9mRNA含量较B组和C组低，B组表达较C组低。结论：外源性的BMSC可以减轻肺纤维化，生存素基因能够抑制BMSC的凋亡，延长BMSC减轻肺纤维化的作用。