近年来糖尿病的发病率越来越高,以胰岛素抵抗为标志的二型糖尿病是发病率最高的一种,相关的治疗药物降糖效果不稳定,且有显著的副作用存在。青钱柳作为一种传统的降糖中药,其显著的降糖作用、胰岛素增敏效果和无副作用,近年来受到广泛关注,但其降糖机制目前还没有明确的结论。本实验通过提取青钱柳降糖成分,用2-脱氧葡萄糖荧光素(2-NBDG)荧光探针检测其降糖效果,建立胰岛素抵抗细胞模型,利用质粒转染技术、蛋白免疫印迹技术和荧光定量PCR技术,检测青钱柳水提物对与细胞吸收葡萄糖相关的葡萄糖转运蛋白GLUT 1和GLUT 4以及其转运相关的伴侣分子GRP 78的表达和分布的影响。主要结果如下:1.用细胞可吸收而不可代谢的荧光探针2-NBDG检测青钱柳水提物促进细胞吸收葡萄糖,结果表明,青钱柳水提物能够显著增加胰岛素抵抗细胞累积荧光信号,表明青钱柳水提物有良好的促进细胞吸收葡萄糖的效果。2.用带有荧光蛋白与GLUT 1融合蛋白DNA序列的质粒转染试验结果表明,胰岛素抵抗细胞中青钱柳水提物能够促进GLUT 1蛋白从细胞胞浆向细胞膜转运,促进细胞吸收葡萄糖;蛋白免疫印迹试验结果表明胰岛素抵抗细胞中青钱柳水提物能够增加GRP 78和GLUT 4蛋白表达,改变其胞内分布,促进其从细胞胞浆向细胞膜转运,改善细胞胰岛素抵抗。3.荧光定量PCR试验结果显示胰岛素抵抗细胞中青钱柳水提物能够增加GRP 78 m RNA表达,可能促进了GRP 78基因的表达。结果显示,青钱柳具有良好的降糖和胰岛素增敏作用,这些作用可能是通过增加GLUT 4的蛋白表达、GRP 78的蛋白和基因表达、促进GRP 78、GLUT 1和GLUT 4从细胞质向细胞膜转运来完成的。