激酶的过度表达会诱发癌症,间变性淋巴瘤激酶（Anaplastic Lymphoma kinase,ALK）常被认为是肿瘤驱动基因。迄今尚未有针对ALK为靶点进行生化检测的研究,本文主要选取了三种原理各不相同的非同位素均相激酶检测方法,分别是ADP-Glo,HTRF以及Z-lyte,选择ALK作为研究对象,建立并优化这三种激酶检测方法,测定其在不同方法中的激酶用量、表观ATP Km、底物多肽Km、DMSO耐受性、板间均一性等。筛选ALK的抑制剂在药物开发方面有重要意义,可作为非常有用的抗癌药物。目前,已经有多个针对ALK的靶向小分子抑制剂的药物已经上市,如克唑替尼、色瑞替尼和艾乐替尼等。有研究表明,ALK的第一代小分子抑制剂克唑替尼有良好的临床效果,但克唑替尼有耐药问题。因此,ALK抑制剂的新一轮筛选是亟需解决的问题。本文通过三种激酶活性检测方法对41个化合物的IC₅₀,包括5个已知IC₅₀的激酶抑制剂进行研究,通过对比结果表明,三种检测方法的重复良好,检测结果稳定,均适用于高通量筛选,各自有其优缺点及适用性:ADP-Glo方法对底物和抗体要求不高;HTRF方法激酶用量最少,可以检测更有效能的化合物;Z-lyte方法特异性稳定且读板较快。我们应该根据不同研究阶段和研究内容来选择上述方法,为寻找新的激酶靶向药物提供了参考价值。