【摘 要】
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干扰素调节因子7(interferonregulatorfactor7,IRF-7)能够诱导Ⅰ型干扰素的合成。在病毒感染宿主细胞时,IRF-7可以结合到干扰素基因的启动子上,调节干扰素的表达,诱导干扰素
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干扰素调节因子7(interferonregulatorfactor7,IRF-7)能够诱导Ⅰ型干扰素的合成。在病毒感染宿主细胞时,IRF-7可以结合到干扰素基因的启动子上,调节干扰素的表达,诱导干扰素的产生。除此以外,IRF-7还能直接与病毒基因启动子或病毒蛋白相互作用,调节病毒基因的表达和病毒的复制。因此,它在细胞抗病毒抗肿瘤防御反应以及细胞先天免疫反应中扮演着重要的角色,是干扰素调节因子家族中最重要的成员之一。
IRF-7只有进入到细胞核中,才能与DNA结合,激活其下游基因,进而发挥其生物学效应,因此入核是IRF-7发挥功能的一个必备条件。前期研究发现,IRF-7蛋白中赖氨酸残基的突变会影响IRF-7激活IFN启动子的能力,影响IRF-7结合DNA的能力等,本文试图分析这种影响是否会通过改变IRF-7的定位来实现。本文把IRF-7的野生型和15个赖氨酸突变体从pCMV-Tag2B载体上亚克隆到pEGFP-C3-Linker载体上,构建了16个与增强型绿色荧光蛋白EGFP融合的IRF-7真核表达质粒,然后转染入293T细胞中,通过细胞核质分离和显微观察研究带有FLAG或EGFP标签的野生型及15个赖氨酸突变型IRF-7蛋白在细胞内定位的变化,发现赖氨酸残基发生突变后IRF-7可以进入到细胞核中,说明赖氨酸突变会影响IRF-7的定位。比较两套带有不同标签的IRF-7表达质粒,发现其中的IRF-7都可以表达,但在细胞内的定位是不同的,融合在IRF-7N-端的EGFP标签影响IRF-7在细胞内的定位。本文工作为研究赖氨酸对IRF-7定位的影响提供了重要的实验数据。
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