精子介导基因转移是以精子为载体，在受精时将外源目的基因导入卵母细胞，是目前转基因动物研究中简单而高效的方法学之一。本试验主要研究了在猪精子介导基因转移过程中精子与外源结合的影响因素，并对利用精子载体法制备转基因猪胚胎进行了初步研究，为利用精予介导法生产转基因猪和其它转基因哺乳动物提供了技术参考。　　 本试验进行了如下研究　　 一、猪精子结合和内化外源基因的影响因素研究:精子结合和内化外源基因的效率是精子介导转基因成功的关键。本试验以DIG标记的线性化EGFP作为示踪基因来检测猪精子结合和内化外源基因的影响因素，结果表明:猪精子能够自发结合外源基因，结合部位主要在精子顶体后区。精子结合外源DNA的阳性率随共孵育时间延长而增加，在37℃或39℃时孵育60分钟后，阳性率不再增加;在17℃时孵育90分钟后，阳性率不再增加。在检查的15只公猪样本中，精子与外源DNA的结合率为6.57％-35.81％，内化率为2.99％-24.66％，个体间差异显著(p＜0.01)。精浆能够强烈抑制外源基因的结合和内化，脂质体及DMSO能够显著提高转染效率。死精子能够结合外源基因，但不能将其内化;反复冻融导致质膜破裂的精子对外源基因有更高的结合率，且不受个体影响。　　 二、猪体外受精的研究:探讨猪胚胎体外生产过程中各环节的相关影响因素，以期建立起一套行之有效的猪胚胎体外培养系统，为生产转基因猪胚胎提供技术支持。结果表明:抽吸法从每只卵巢平均采得卵母细胞个数显著低于切割法和破碎法，但所得可用卵母细胞率、成熟率均显著高于另两种方法;中等大小卵泡卵母细胞成熟率最高，小卵泡的成熟率显著低于大、中卵泡;猪卵母细胞体外成熟最佳培养温度为39℃;20IU/mlPMSG+10IU/mlhCG的激素组合最有利于猪卵母细胞的体外成熟;获能液中单独添加肝素不能使猪卵母细胞受精，联合使用咖啡因和肝素可以提高受精率;TCM199不支持胚胎越过4-细胞发育阻断，NCSU-23添加BSA的培养效果优于添加FCS。　　 三、利用精子载体法体外生产转基因猪胚胎的研究:经过转染处理的精子体外受精后卵裂率和4-细胞率显著低于未转染的精子;试验共检测了31枚转染胚胎，其中有4枚PCR结果呈阳性，阳性率为12.9％，试验结果证明了精于介导法生产转基因猪胚胎的可行性，为下一步转基因胚胎的移植奠定了基础。