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研究背景肺癌被认为是所有肿瘤中致死率最高的肿瘤。肺癌的80%为非小细胞肺癌(Non-small cell lung caancer, NSCLC),65%的非小细胞肺癌确诊时已处于晚期,丧失手术机会。晚期肺癌非小细胞肺癌目前主要治疗手段为放疗、化疗,但放疗、化疗的副反应及并发症多,病人的生活质量受到严重影响,严重影响肺癌的预后。分子靶向治疗针对肿瘤细胞特异靶点,较少损伤正常细胞和组织,相对放疗、化疗有明显的优势。目前研究比较深入的靶点有：表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2),蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)等。在肺癌的靶向治疗中,针对EGFR介导的信号通路的抗肿瘤治疗已经取得了一定的进展。针对EGFR的抗肺癌治疗目前研究的比较成熟的有EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂(吉非替尼、厄罗替尼)和EGFR的单克隆抗体(昔妥西单抗)。吉非替尼、厄罗替尼已经被批准应用于临床肺腺癌的二线或三线治疗。现在越来越多的试验证据表明COX-2在促进肿瘤细胞的生长和血管形成上起着关键作用。COX-2可以作为肿瘤治疗的一个重要靶点,通过抑制COX-2介导的一系列信号通路,干预肿瘤生长相关生物学行为,起到抗肿瘤作用。也有有研究表明,EGFR和COX-2介导的信号通路之间存在着交叉对话,共同参与与肿瘤形成及生长相关的关键生物过程,应用药物联合阻断EGFR和COX-2介导的信号通路可起到协同的抗肿瘤效应。EGFR和COX-2双靶点阻断后的抗肿瘤效应在头颈鳞癌的实验室及临床研究均有报道,而在肺癌治疗的研究中,目前仅存在于细胞水平。本研究旨在通过建立肺癌裸鼠移植瘤模型,研究这种靶向联合治疗对肺腺癌的生长,肿瘤微血管形成及相关蛋白表达的可能影响。目的1.体内水平探讨厄洛替尼和塞来昔布联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COX-2)所介导的信号通路后,对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长的影响2.体内水平探讨厄洛替尼和塞来昔布联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COX-2)所介导的信号通路后对肿瘤血管生成的影响。3.体内水平探讨厄洛替尼和塞来昔布联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COX-2)所介导的信号通路后对肿瘤组织BCL-2, Bax, COX-2, EGFR, p-EGFR表达的影响方法常规培养的对数生长期人肺癌细胞A549接种于裸鼠皮下,成瘤后随机分为4组：对照组(n=6,1%Tween80),厄洛替尼组(n=6,30mg/kg/d),塞来昔布组(n=6,100mg/kg/d),厄洛替尼塞来昔布联合给药组(n=6,厄洛替尼30mg/kg/d和塞来昔布100mg/kg/d),每天给予上述相应药物灌胃处理,观察裸鼠生长状况,每周两次测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线。约40d后处死裸鼠,称取各处理组移植瘤质量。切取移植瘤组织,采用免疫组化检测各处理组肿瘤组织的微血管密度(MVD),Bcl-2、Bax的表达率,ELISA法检测各处理组裸鼠血清中血管内皮生长因子(sVEGF)的含量,Western Blot法检测各处理组Bcl-2、Bax,EGFR、 p-EGFR、COX-2蛋白的表达情况并计算Bcl-2/Bax的值。结果1.联合用药组肿瘤明显小于塞来昔布组、厄洛替尼组和对照组(P<0.05)。2.联合用药组微血管数目、sVEGF的含量明显小于塞来昔布组、厄洛替尼组和对照组(P<0.05)。3.厄洛替尼组Bcl-2的表达明显小于对照组(P<0.05),塞来昔布组Bcl-2的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),联合用药组Bcl-2的表达与对照组、塞来昔布组、厄洛替尼组相比均明显降低(P<0.05)。Bax的表达在各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。联合用药组Bcl-2/Bax的值较塞来昔布组、厄洛替尼组明显降低(P<0.05)。4.厄洛替尼组、塞来昔布组、联合给药组p-EGFR、COX-2的表达低于对照组(P<0.05),EGFR的表达在各组之间差异无显著意义(P>0.05)。联合给药组p-EGFR、COX-2的表达低于.厄洛替尼组、塞来昔布组(P<0.05)。结论塞来昔布联合厄洛替尼相对厄洛替尼或塞来昔布能更明显抑制人肺癌移植瘤的生长。其中减少微血管生成、增加肿瘤细胞的凋亡可能为其抗肿瘤机制。