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背景:近年来,黑色素瘤发病率不断增高,死亡人数逐年增加。黑色素瘤常伴有多种基因位点突变,且其恶性程度高,导致临床治疗黑色素瘤的一般疗法往往不能取得理想的疗效。肿瘤免疫疗法已经在黑色素瘤的治疗中展现了良好前景,但其仍有缺陷。双氢青蒿素(DHA)对多种肿瘤细胞展现了明显的抑制作用。此外,研究指出DHA具有影响T细胞增殖和分化的功能。但是,DHA治疗黑色素瘤的相关研究罕见,且其具体分子机制尚不明确。目的:明确DHA对黑色素瘤增殖和迁移的抑制作用,并探究其可能的作用机制。方法:CCK8法检测体外不同浓度DHA对黑色素瘤细胞B16F10增殖的抑制作用;伤口愈合实验检测DHA对B16F10细胞横向迁移能力的影响;克隆形成实验检测DHA对单个B16F10细胞形成群落能力的影响;Hoechst33342染色用于观察经DHA处理后,B16F10细胞凋亡的细胞核形态;将B16F10细胞接种于BALB/c小鼠皮下构建黑色素瘤小鼠模型,实验动物随机分为三组,即模型组、低剂量组(25mg/kg浓度的DHA)、高剂量组(50mg/kg浓度的DHA),各组小鼠每天灌胃一次,共14天,每天对小鼠进行称重并观察肿瘤生长情况;蛋白印迹法用于检测MMP2、凋亡相关蛋白、STAT1、STAT3、NF-κB、Akt通路相关蛋白、PD-L1和IFN-γ的表达情况;ELISA用于检测各组小鼠血清中ALT、AST、Cr、β2-MG、IL-6和IL-10及细胞培养上清液中IL-10的含量;H&E染色用于观察各组小鼠黑色素瘤的组织学变化;免疫组织化学染色用于检测各组小鼠黑色素瘤中Ki-67、CD8和Foxp3的表达情况;RT-PCR用于检测各组小鼠黑色素瘤中T-bet、GATA3、ROR-γt和Foxp3的表达情况;流式细胞术用于检测各组小鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞、CD8+T细胞、CD4+IFN-γ+T细胞和CD8+IFN-γ+T细胞的含量。结果:1.CCK8结果显示,DHA呈时间-剂量依赖性地抑制B16F10细胞增殖(P<0.05);2.伤口愈合实验结果显示,B16F10细胞横向迁移能力被DHA呈剂量依赖性地抑制;3.克隆形成实验结果显示,DHA处理组中,B16F10形成群落明显减少,且呈剂量依赖性;4.Hoechst3 3342染色结果显示,与模型组相比,DHA治疗组中的亮蓝色凋亡细胞核显著增多;5.蛋白印迹实验结果显示,DHA在体内和体外均能抑制黑色素瘤中 MMP2、Bcl-2、p-STAT3 和 p-p65 的表达(P<0.05),促进 Bax、cleaved caspase 9、cleaved caspase 3、cleaved PARP、p-STAT1 和 IFN-γ 的表达(P<0.05),然而未改变PD-L1和p-Akt的表达(P>0.05);6.ELISA结果显示,各组间ALT、AST、Cr和β2-MG水平无差异(P>0.05),并且DHA处理使IL-6和IL-10的表达减少(P<0.05);7.小鼠黑色素瘤荷瘤模型显示,与模型组相比,DHA治疗显著缓解黑色素瘤,明显减少肿瘤体积(P<0.05);8.H&E染色结果显示,模型组可见大量黑色素瘤细胞呈巢状分布,黑色素瘤细胞胞浆丰富,病理性核分裂象常见;DHA治疗组中黑色素瘤细胞散在分布,偶见肿瘤细胞巢,黑色素瘤细胞胞浆肿胀,细胞核固缩碎裂溶解;9.免疫组织化学染色结果显示,DHA治疗减少了增殖标志物Ki-67的表达,增加了 CD8阳性细胞的数量,减少了 Foxp3阳性细胞的数量;10.RT-PCR结果显示,DHA显著减少黑色素瘤中GATA3、ROR-γt和Foxp3的表达(P<0.05),但对T-bet的表达无明显作用(P>0.05);11.流式细胞术结果显示:DHA显著减少CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量(P<0.05),增加CD8+T细胞及CD8+IFN-γ+T细胞数量(P<0.05),但CD4+IFN-γ+T细胞数量无显著变化(P>0.05)。结论:DHA通过抑制STAT3磷酸化,促进黑色素瘤线粒体凋亡并改变肿瘤微环境中IL-10等细胞因子的表达。肿瘤微环境中细胞因子的改变削弱了 Treg的免疫抑制作用,并增强CTL对黑色素瘤的杀伤作用。