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背景及目的:皮肤鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)在皮肤非黑素恶性肿瘤中发病率占第二位,是一种起源于表皮或附属器角质形成细胞的恶性增殖性疾病。日光性角化(Actinic keratosis,AK)、鲍恩氏病(Bowens disease,BD)与皮肤鳞癌同为复层鳞状上皮细胞来源的皮肤病变,AK是SCC的癌前病变,BD是原位鳞癌,都可以向SCC进展而获得侵袭性。三者均多发生于身体暴露部位,给患者身心造成相当程度的痛苦,影响患者的生活质量。随着老龄化社会的来临,老年人口增加,多种慢性疾病呈现出增长趋势,皮肤肿瘤也相应增多,自癌前病变、原位鳞癌到具有侵袭性的鳞癌是一个多阶段多因素参与的复杂过程,三者之间的具体联系和发展进程有待我们更为深入的探究。PKD1是钙离子/钙调蛋白依赖性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶D家族中最重要的一员,该蛋白在基因水平被称为PRKD1m RNA,位于人类染色体的14qll位置,广泛表达于各组织和器官中,在调节一系列细胞生物学行为、维持细胞功能方面发挥十分重要的作用。PKD1蛋白在多种肿瘤组织中异常表达,皮肤病领域内已证实在基底细胞癌、黑色素瘤等皮肤恶性肿瘤中表达异常,对表皮角质形成细胞的增殖和分化具有重要的影响。多数研究指出PKD1对细胞的作用是通过其自身的磷酸化来调节的,其与皮肤疾病相关的最重要的两个磷酸化位点是Ser916和Tyr463。本实验从基因和蛋白水平上检测PKD1及其两个磷酸化位点p-PKD1-Tyr463、p-PKD1-Ser916在SCC、BD、AK及正常表皮组织中的表达情况,以期探讨PKD1在皮肤鳞状细胞癌的逐步形成和发展过程中发挥的作用和意义。方法:1.运用实时定量PCR方法检测PKD1转录水平(PRKD1m RNA)在SCC组、BD组、AK组及正常对照组各样本中的表达情况,分析PRKD1m RNA在各组中的表达差异。2.运用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测SCC组、BD组、AK组及正常对照组各样本中PKD1总蛋白及其磷酸化位点p-PKD1-Tyr463、p-PKD1-Ser916的蛋白表达情况。3.运用免疫组织化学染色法(Immunohistochemical staining method)检测SCC组、BD组、AK组及正常对照组的石蜡组织中PKD1总蛋白及其磷酸化位点p-PKD1-Tyr463、p-PKD1-Ser916的蛋白表达在组织的具体部位。结果:1.正常皮肤组织、SCC、BD、AK组织中PRKD1m RNA的表达量分别为0.640.09,5.371.06,2.690.72,2.430.46,四组间PRKD1m RNA表达差异具有统计学意义(F=21.37,均P<0.05)其中,SCC组织中PRKD1m RNA的表达量是正常组的8.4倍且明显较BD和AK组高(均P<0.05),BD和AK组织之间差异无明显统计学意义(P>0.05)。2.免疫组织化学检测PKD1在皮肤鳞癌组织和原位鳞癌(BD)组织中主要表达在棘层细胞及异形细胞的胞质和包膜,明显高于正常对照组织(χ2BD=4.29,χ2SCC=12.96,均P<0.01),SCC组中PKD1的表达随着鳞癌病理分级的提高而增加。AK组和正常对照组相比差异无明显统计学意义(χ2=1.20,P>0.05)。p-PKD1-Ser916仅在部分高分化SCC的癌巢部分少量表达,但和正常组相比并无明显统计学意义(Fisher确切检验,P>0.05),低分化鳞癌组织中反而未发现其表达。p-PKD1-tyr463仅在SCC、BD组织少量表达,两者之间相比无明显统计学差异(χ2=1.69,P>0.01)。在SCC组中PKD1与其磷酸化位点Tyr463的表达呈正相关(rcc=0.479,P<0.05)。3.Western blot检测PKD1及其磷酸化位点Ser916和Tyr463在各组中的表达与免疫组化结果大致趋势相符,以GAPDH为内参蛋白,PKD1仅在SCC和BD组织中高表达,p-PKD1-tyr463仅在SCC组织中高表达,而p-PKD1-Ser916在各组组织中表达量均较低。结论:1.PKD1及其磷酸化位点tyr463在皮肤鳞状细胞癌及原位鳞癌中均有不同程度的高表达,且PKD1总蛋白在随着鳞癌组织病理分级的提高而增加。2.PKD1及其磷酸化位点Tyr463可能参与复层鳞状上皮来源的皮肤肿瘤的形成和进一步发展,在皮肤鳞状细胞癌形成进程中PKD1可能通过Tyr463位点活化而发挥促进作用,有望成为皮肤鳞状细胞癌治疗的新靶点。