玻璃化冷冻方法在兔胚胎冷冻保存中的应用

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本文通过兔胚胎毒性实验和玻璃化冷冻的研究,确定对胚胎无毒性或毒性小的冷冻保护剂的种类、最佳浓度、胚胎发育阶段,为玻璃化冷冻方法在兔胚胎冷冻保存中的应用提供理论基础。 1.用海藻糖和蔗糖处理的兔早期囊胚存活率分别为93.8%和70.0%。经统计分析,兔早期囊胚存活率海藻糖组显著高于蔗糖组(P<0.05)。 2.0.5M海藻糖溶液做基础液,分别用OM(对照组)、2.0M、2.5M、3.0M甘油处理兔早期囊胚,其存活率分别为83.9%、86.7%、93.8%、83.3%。经统计分析,对照组与不同浓度甘油组之间兔早期囊胚的存活率均无显著性差异(P>0.05)。 3.2.5M甘油溶液对不同发育阶段胚胎存活率的影响实验中,兔早期囊胚和桑椹胚的存活率分别为93.8%、70.0%。经统计分析,早期囊胚的存活率极显著高于桑椹胚(P<0.01)。 4.不同浓度乙二醇(EG)对兔胚胎冷冻效果的影响实验中,解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率,对照组与10%EG。20%EG组之间无显著性差异(P>0.05),但对照组、10%EG、20%EG组的解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率均极显著高于30%EG组(P<0.01)。 5.比较兔体内胚胎与体外胚胎冷冻效果的影响实验中,体内胚胎和体外胚胎的解冻回收后正常胚胎数分别为79.4%、54.1%;囊胚孵化率分别为38.2%和24.3%。经统计分析,解冻回收后正常胚胎数体内胚胎组显著高于体外胚胎(P<0.05),囊胚孵化率两组之间无显著性差异(P>0.05)。 6.不同冷冻方法对兔胚胎冷冻效果的影响实验中,胚胎解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率,缓慢冷冻法与玻璃化冷冻法之间均无显著性差异(P>0.05)。
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