嗜群血蜱(Haemaphysalis concinna)为动物体表的专性吸血昆虫,广泛分布于世界各国,目前已在我国10多个省区的多种动物体上发现该蜱。嗜群血蜱叮咬并吸食宿主大量血液,引起宿主局部皮肤肿胀、发炎、骚痒和溃疡等。此外,该蜱还可传播多种病原体,是严重危害我国畜牧业的重要蜱种之一。蜱病的防治目前仍以药物为主,但灭蜱药物的长期使用易导致抗药虫株的出现,尤其是存在药物在畜产品中的残留以及对环境的污染等问题,因此,迫切需要寻找新的防治方法。目前,抗蜱免疫被认为是控制蜱与蜱传播疾病最有潜力的方法之一,但在国内外尚无关于嗜群血蜱保护性抗原基因及抗蜱疫苗的研究报道。为此,本研究开展了嗜群血蜱保护性抗原基因(Hc-23基因)的克隆与原核表达,同时分析了该基因的免疫原性,为抗嗜群血蜱基因工程疫苗的研制奠定了基础。主要研究工作和结果如下:1、参考已报道的长角血蜱中国株和日本株保护性抗原基因P27/30的核苷酸序列设计合成一对特异性引物,用该引物对实验室饲养的嗜群血蜱饥饿成蜱的总RNA进行RT-PCR扩增,得到631 bp的目的片段。经DNAStar软件分析发现,631 bp的片段中包含一个长度为603 bp的完整开放阅读框(ORF),并将此片段命名为Hc-23基因(GenBank登录号为FJ425897)。对Hc-23基因进行生物信息学分析,发现Hc-23基因共编码201个氨基酸,该氨基酸预测分子量为23.386 kDa,等电点理论值为9.77,具有较强的亲水性。同源性分析表明,嗜群血蜱Hc-23基因与中国株长角血蜱肌钙蛋白基因P27/30同源性高达99.83%,仅在第300位碱基处发生了c-t颠换;与日本株长角血蜱肌钙蛋白基因P27/30同源性高达99.67%,分别在第183位碱基处发生了a-g颠换和第300位碱基处发生了c-t颠换;与镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅰ基因同源性为88.06%。2、根据获得的基因序列设计一对原核表达引物,以pMD18-T-Hc-23质粒为模板进行PCR扩增,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,最后亚克隆入pET-32a(+)表达载体。将鉴定正确的重组表达质粒(pET32a-Hc-23)转化表达宿主菌BL21(DE3)进行原核表达,同时对表达条件进行优化,确定了pET32a-Hc-23表达的最佳条件为37℃、1mmol╱L的IPTG诱导4 h,融合表达蛋白的分子量约为43 kDa,并以包涵体的形式存在。免疫印迹分析发现,空载体菌表达产物不能被兔抗嗜群血蜱阳性血清所识别,而重组载体菌表达产物则可被兔抗嗜群血蜱阳性血清所识别。