目的:本实验选用大鼠坐骨神经钳夹损伤模型及横断损伤模型,通过电针针刺环跳穴所对应的不同组织部位即肌肉层和神经干,比较分析二者在治疗不同程度坐骨神经损伤中出现的疗效差异。从轴浆运输功能恢复的角度出发,以驱动蛋白(Kinesin)及动力蛋白(Dynein)为指标,分析电针针刺治疗对坐骨神经损伤后轴浆运输功能恢复的影响及机理。材料与方法:选用SPF级SD大鼠84只,体质量200±20 g,月龄2~3个月,雌雄各半。大鼠购入后,于SPF级动物室中适应性饲养一周。一周后,将84只SD大鼠采用随机数字表法随机分为七组:空白对照组,钳夹模型组,横断模型组,横断非神经干组,横断神经干组,钳夹非神经干组,钳夹神经干组,每组各12只。空白组:保持同样的条件,正常喂养,不做其他处理。钳夹模型组与横断模型组:造模成功后,保持同样的条件,正常喂养,不做其他处理。横断非神经干组与钳夹非神经干组:造模成功第4 d,针刺环跳穴肌肉层,不触碰神经干,大鼠无肌肉抽搐、足趾颤抖的反应出现,连接电针仪进行治疗,选用疏密波,频率为2 Hz,电流为1 m A,电针治疗时强度以针刺部位局部轻微抽动为准,每次治疗20 min,1次/d,连续治疗10日。横断神经干组与钳夹神经干组:造模成功第4 d,针刺环跳穴深及神经干,大鼠出现瞬间肌肉抽搐、足趾颤抖的反应,连接电针仪进行治疗,另一端用湿纱布缠于尾部制成无关电极,选用疏密波,频率为2Hz,电流为1 m A,电针治疗时强度以针刺部位局部轻微抽动为准,每次治疗20 min,1次/d,连续治疗10日。末次针刺后,通过斜板实验方法检测,评价各组大鼠的肌力及运动功能恢复情况;称量大鼠体重并记录,采用过量麻醉法处死大鼠,取双侧腓肠肌,计算腓肠肌湿重恢复率来评价各组大鼠的肌肉萎缩程度;取包括损伤段在内的上下各2mm的坐骨神经组织及L4-L5节段脊髓,应用HE染色观察病理形态变化;利用免疫组织化学法及Western blot,测定L4-L5节段脊髓内驱动蛋白Kinesin及动力蛋白Dynein的表达情况,所得结果进行统计分析。1.大体行为学观察各组大鼠造模后一般状况良好,摄食饮水情况基本正常,毛发较有光泽。造模组大鼠出现跛行,行走时患肢屈伸不利,足呈轻度外翻状,不负重,患肢行走无力或拖行,膝关节明显着地,且时常伴有舔舐、悬空等后肢保护现象。模型组个别大鼠出现足部肿胀、溃疡、缺趾等现象。与模型组相比,治疗组各组大鼠肢体活动度明显改善,神经干组优于非神经干组,钳夹组优于横断组。结果:2.斜板实验结果与空白对照组比较,钳夹模型组及横断模型组明显降低(P<0.01),说明坐骨神经损伤后,大鼠的运动功能减退,肌力降低,造模成功;而钳夹神经干组无显著差异,说明经过针刺治疗,其已接近空白组水平。与钳夹模型组比较,钳夹神经干组及钳夹非神经干组显著升高(P<0.01);与横断模型组比较,横断神经干组及横断非神经干组显著升高(P<0.01);横断神经干组与横断非神经干组相比,显著升高(P<0.05);钳夹神经干组与钳夹非神经干组相比,显著升高(P<0.05);钳夹神经干组与横断神经干组相比,无显著性差异;钳夹非神经干组与横断非神经干组相比,有显著差异(P<0.05)。3.腓肠肌湿重恢复率与空白对照组比较,钳夹模型组及横断模型组大鼠患肢肌肉明显萎缩,且横断模型组个别大鼠出现足部溃疡现象,腓肠肌恢复率降低(P<0.01);与钳夹模型组比较,钳夹非神经干组及钳夹神经干组大鼠腓肠肌湿重恢复率明显增高(P<0.01);与横断模型组比较,横断神经干组大鼠腓肠肌湿重恢复率明显增高(P<0.01),横断非神经干组大鼠腓肠肌湿重恢复率无明显增高;横断神经干组与横断非神经干组相比,大鼠腓肠肌湿重恢复率明显增高(P<0.05);钳夹神经干组与钳夹非神经干组相比,大鼠腓肠肌湿重恢复率明显增高(P<0.01);钳夹神经干组与横断神经干组相比,大鼠腓肠肌湿重恢复率明显增高(P<0.01);钳夹非神经干组与横断非神经干组相比,大鼠腓肠肌湿重恢复率明显增高(P<0.05)。4.各组大鼠脊髓组织HE染色观察空白对照组脊髓中神经元细胞排列整齐,细胞核位于细胞中央;钳夹模型组脊髓中神经元排列不规则,细胞出现肿胀变性现象;横断模型组脊髓中神经元变性与钳夹模型组类似,其神经元损伤程度更重;非神经干组包括横断非神经干组、钳夹非神经干组,脊髓中神经元变性,神经元排列较规则,可见少量细胞核再生;神经干组包括横断神经干组、钳夹神经干组,脊髓中神经元少量变性、神经元排列规则,可见细胞核再生。5.各组大鼠坐骨神经HE染色观察空白对照组中轴突及雪旺细胞排列整齐;钳夹模型组神经纤维排列紊乱,轴突、髓鞘崩解,雪旺细胞增多;横断模型组神经纤维、髓鞘受损程度较钳夹模型组更大;非神经干组包括横断非神经干组、钳夹非神经干组,神经纤维紊乱程度减轻,雪旺细胞增多,神经纤维数量增多;神经干组包括横断神经干组、钳夹神经干组,其病理改变与非神经干组类似,且病理改善程度优于非神经干组。6.各组大鼠L4-L5脊髓中驱动蛋白Kinesin的表达水平检测结果应用免疫组织化学法及Western blot检测Kinesin的表达水平,结果显示:与空白对照组比较,其余各组大鼠脊髓组织中Kinesin蛋白表达水平显著上调(P<0.01);与钳夹模型组比较,钳夹非神经干及钳夹神经干组大鼠脊髓组织中Kinesin蛋白表达水平显著上调(P<0.01);与横断模型组比较,横断神经干大鼠脊髓组织中Kinesin蛋白表达水平显著上调(P<0.01),横断非神经干大鼠脊髓组织中Kinesin蛋白表达水平无显著上调;横断神经干组与横断非神经干组相比,大鼠脊髓组织中Kinesin蛋白表达水平显著上调(P<0.01);钳夹神经干组与钳夹非神经干组相比,大鼠脊髓组织中组Kinesin蛋白表达水平显著上调(P<0.05);钳夹神经干组与横断神经干组相比,大鼠脊髓组织中Kinesin蛋白表达水平显著上调(免疫组化检测结果,P<0.01;Western blot检测结果,P<0.05);钳夹非神经干组与横断非神经干组相比,大鼠脊髓组织中Kinesin蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。7.各组大鼠L4-L5脊髓中动力蛋白Dynein的表达水平检测结果应用组织化学法及Western blot检测Dynein的表达水平,结果显示:与空白对照组比较,其余各组大鼠脊髓组织中Dynein蛋白表达水平显著上调(P<0.01);与钳夹模型组比较,钳夹非神经干及钳夹神经干组大鼠脊髓组织中Dynein蛋白表达水平显著上调(P<0.01);与横断模型组比较,横断神经干大鼠脊髓组织中Dynein蛋白表达水平显著上调(P<0.01),横断非神经干大鼠脊髓组织中Dynein蛋白表达水平无显著上调;横断神经干组与横断非神经干组相比,大鼠脊髓组织中Dynein蛋白表达水平显著上调(免疫组化检测结果,P<0.01;Western blot检测结果,P<0.05);钳夹神经干组与钳夹非神经干组相比,大鼠脊髓组织中Dynein蛋白表达水平显著上调(免疫组化检测结果,P<0.01;Western blot检测结果,P<0.05);钳夹神经干组与横断神经干组相比,大鼠脊髓组织中Dynein蛋白表达水平显著上调(P<0.01);钳夹非神经干组与横断非神经干组相比,大鼠脊髓组织中Dynein蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。结论:1.电针针刺环跳穴可增强大鼠腓肠肌肌力,防止肌肉萎缩,且针刺神经干疗效优于针刺非神经干,钳夹组疗效优于横断组。2.电针针刺环跳穴可保护受损神经元,促进轴突再生,且针刺神经干疗效优于针刺非神经干,钳夹组疗效优于横断组。3.电针针刺环跳穴能上调坐骨神经损伤大鼠L4-L5脊髓节段中驱动蛋白Kinesin、动力蛋白Dynein的表达,且神经干组表达量高于非神经干组,钳夹组表达量高于横断组。4.从马达蛋白动力层面促进轴浆运输功能的恢复,为损伤后神经元与终末效应器之间建立传送营养的通路,可能是针刺促进周围神经损伤再生及功能恢复的相关机制之一。