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目的:本研究旨在探讨上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程在Fascin促进垂体腺瘤(Pituitary adenoma,PA)的侵袭中的作用,为PA侵袭的机制提供实验依据。方法:1.将小鼠垂体腺瘤At T-20细胞进行实验,实验分组如下:(1)PA+blank control组(PA+BC组)、(2)PA+Fascin negative control组(PA+Fascin-NC组),(3)PA+Fascin interference group组(PA+Fascin-si RNA组),运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异性下调小鼠垂体瘤细胞At T-20中Fascin的表达。Transwell实验检测Fascin下调后细胞的侵袭潜能变化。使用Cell Counting Kit-8和流式细胞术检测Fascin下调后的细胞增殖变化、周期分布变化和细胞凋亡数量变化情况。使用透射电子显微镜观察Fascin下调后细胞的超微结构变化。采用蛋白质免疫印迹法、免疫荧光和实时定量PCR检测Fascin下调后细胞的上皮标志物(E-钙粘蛋白)、Fascin、间充质标志物(N-钙粘蛋白、波形蛋白)和转录因子(Twist)的表达变化。2.将小鼠垂体腺瘤At T-20细胞分为(1)PA+blank control组(PA+BC组)、(2)PA+E-cadherin negative control组(PA+E-cadherinNC组)、(3)PA+E-cadherin over-expression组(PA+E-cadherin OE组),通过过表达小鼠垂体瘤细胞At T-20中E-cadherin的表达。Transwell实验检测E-钙粘蛋白过表达后的细胞侵袭潜能变化。Cell Counting Kit-8和流式细胞术检测E-钙粘蛋白过表达后的细胞增殖变化和周期分布变化。采用蛋白质免疫印迹法和实时定量PCR检测E-钙粘蛋白过表达后的Fascin、E-钙粘蛋白和转录因子(Twist)的表达。统计学分析则使用Pearson统计法检测EMT相关标志物、侵袭和Fascin之间的相关性。结果:1、下调Fascin表达通过EMT进程对At T-20细胞的影响。(1)CCK-8检测细胞增殖结果:PA+Fascin-si RNA组的垂体腺瘤细胞增殖能力与PA+FascinNC组相比下降。(2)Transwell检测细胞侵袭结果:PA+Fascin-si RNA组的垂体腺瘤细胞侵袭潜能与PA+Fascin-NC组相比下降。(3)细胞周期和凋亡结果:与PA+Fascin-NC组相比,PA+Fascinsi RNA组中的处于G1期的垂体腺瘤细胞比例上升;处于G2和S期的细胞比例则下降。与PA+FascinNC组相比,PA+Fascin-si RNA组中的垂体腺瘤细胞的凋亡数量明显上升。(4)TEM观察细胞超微结构:PA+Fascin-NC组的细胞结构大致正常,PA+Fascin-si RNA组的细胞内出现凋亡的形态学特征,可以见到凋亡小体形成。(5)蛋白质免疫印迹和Real-Time PCR结果:PA+Fascin-si RNA组的E-钙粘蛋白的表达和PA+Fascin-NC组相比上升,而Fascin、N-钙粘蛋白、波形蛋白以及转录因子Twist的表达均下降。(6)免疫组化结果:PA+Fascin-si RNA组的E-钙粘蛋白的表达和PA+FascinNC组相比上升,而Fascin、N-钙粘蛋白、波形蛋白和转录因子Twist的表达均下降。(7)统计学分析显示,侵袭与E-钙粘蛋白的表达呈负相关,而与N-钙粘蛋白、vimentin呈正相关;Fascin的表达与侵袭则呈正相关;Fascin的表达和E-钙粘蛋白的表达呈负相关,而Fascin的表达和N-钙粘蛋白、波形蛋白的表达均呈正相关。2、上调E-钙粘蛋白表达对At T-20细胞、Fascin的影响。(1)CCK-8检测细胞增殖结果:PA+E-cadherin OE组的垂体腺瘤细胞增殖能力与PA+Ecadherin-NC组相比下降。(2)Transwell检测细胞侵袭结果:PA+E-cadherin OE组的垂体腺瘤细胞侵袭潜能与PA+E-cadherin-NC组相比下降。(3)细胞周期结果:与PA+E-cadherin-NC组相比,PA+E-cadherin OE组中的G1期的垂体腺瘤细胞比例下降,而处于G2期的细胞比例则上升,S期的细胞比例则未见明显改变。(4)蛋白质免疫印迹和Real-Time PCR结果:PA+E-cadherin OE组的上皮标志物(E-钙粘蛋白)的表达与PA+E-cadherin-NC组相比表达增加,而Fascin和转录因子Twist表达则减少。(5)统计学分析显示,E-cadherin与侵袭呈负相关,Fascin与E-cadherin呈负相关。结论:Fascin可能是垂体腺瘤侵袭过程中的重要的关键因子,抑制Fascin的表达可以改变各种EMT标记物的表达水平,进而调节垂体肿瘤细胞的进展。Fascin可能通过部分依赖EMT途径促进垂体肿瘤细胞的侵袭。