磁性复合材料的制备、固定化脂肪酶及其催化布洛芬手性拆分的研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:heiying123
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本学位论文论述了手性药物拆分的方法、磁性材料用于固定化酶与固定化酶用于非甾体手性药物拆分的最新研究进展。利用脂肪酶催化酯类不对称水解而获得手性药物,主要有两个问题需要解决:(1)大部分手性药物酯类的溶解度较差,因此酶不易与底物接触。(2)自由酶不稳定,在有机溶液中易失活。为了解决这两个问题,提出了本学位论文的研究思路和选题指导思想。合成了水溶性的布洛芬酯,提高反应底物在水中的溶解度。采用了固定化酶技术,增加了酶的稳定性,克服了自由酶不能重复使用的缺点。因此,制备了四种磁性载体用于脂肪酶的固定化,并且研究了固定化脂肪酶的性质,为了进一步扩大其应用,将固定化酶用于催化水解水溶性布洛芬酯的不对称拆分中。主要开展了以下研究:1.磁性空心和花瓣介孔纳米微球的可控制备及其用于固定化脂肪酶的研究利用溶剂热法,制备出粒径比较均一的Fe304磁性纳米粒子,通过控制原料中铁源的加入量,获得了空心和花瓣两种形貌规整的Fe304磁性纳米粒子。还进行了表面活性剂和气源加入量,反应时间的一系列的条件实验研究,提出了它们形成机理。主要是气泡支持的Ostwald熟化过程的形成机理。将所制得的Fe304磁性纳米粒子经过氨基硅烷偶联剂和戊二醛功能化以后,用于共价固定化皱落假丝酵母脂肪酶,并研究了固定化酶的性质,结果表明,所制备两种磁性固定化酶相对于自由酶具有更好的热稳定性、pH及温度耐受性和重复使用性。花瓣和空心Fe304磁性纳米粒子的载酶量相对于实心Fe304的载酶量有了很大的提高。2.磁性Fe304@壳聚糖/SBA15载体的制备及其用于固定化脂肪酶的研究以壳聚糖作为功能化试剂,用溶剂法制备出Fe3o4@壳聚糖的磁性复合微球,其表面带有氨基,经戊二醛活化后可直接固定化酶,其载酶量达到98.5 mg/g。为了提高载酶量,引入了比表面积大,孔径合适固定化酶的SBA-15。将两种材料复合在一起后,固定化酶量有了明显提高,载酶量高达128.9 mg/g。将两种磁性载体进行固定化酶性质的研究,结果表明,所制备两种磁性固定化酶相对于自由酶具有更好的热稳定性、pH及温度耐受性和重复使用性,与SBA-15复合后的磁性固定化酶的重复使用性要优于Fe304@壳聚糖固定化酶。3.固定化脂肪酶用于水溶性布洛芬酯的不对称水解研究以布洛芬和羟甲基磺酸钠盐为原料成功合成了水溶性的布洛芬酯。将上述四种磁性固定化酶的载体用于催化拆分水溶性布洛芬酯。结果表明,当分别加入四种蛋白含量相同的载体时,Fe304@壳聚糖固定化酶的催化拆分效果要优于其他三种载体。为了对比水溶性布洛芬酯的优势,同时也用固定化酶催化了布洛芬甲酯,乙酯,异丙酯等在水中溶解性较差的酯类。催化结果表明,水溶性的布洛芬酯比其它酯类的催化效果要好很多。在此基础上优化了催化水溶性布洛芬酯的pH、催化时间、底物浓度以及重复使用次数。
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