【摘 要】
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大片形吸虫(Fasciola gigantica)主要寄生在牛、羊等反刍动物肝脏,是我国华东、华南地区的优势虫种,给畜牧业和人民身体健康带来严重危害,但目前还没有有效的药物和疫苗来控
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大片形吸虫(Fasciola gigantica)主要寄生在牛、羊等反刍动物肝脏,是我国华东、华南地区的优势虫种,给畜牧业和人民身体健康带来严重危害,但目前还没有有效的药物和疫苗来控制。本文通过构建大片形吸虫成虫的cDNA文库并获取部分表达序列标签(EST),旨在发现潜在的抗大片形吸虫的候选疫苗分子,为防大片形吸虫病奠定基础。 本研究应用SMART方法构建了高质量的大片形吸虫成虫cDNA文库,经测定,库容量为1.08×10~6 Pfu/mL,重组率为96.6%。扩增后的文库滴度为2.41×10~9Pfu/mL,插入片段平均大小约为1000bp;经大肠杆菌BM25.8质粒化后,从文库中随机挑选40个重组克隆测序,获得32条有效ESTs,经BLASTX和BLASTn程序检索和分析,发现有9条ESTs代表已知基因,16条ESTs相似性较低或无匹配,列为新基因。9条已知基因代表了半胱氨酸蛋白酶、卵壳蛋白、钙连接蛋白等三类功能蛋白,其余新基因也暗示与信号传导、蛋白合成、免疫刺激等基因相关,具有潜在的研究价值;从所获得的ESTs中挑选了一条作为目标序列,运用生物信息学方法并结合相关软件,利用网络数据库进行了电子克隆(in siloco cloning),获得了长度为1920bp的重叠群(contig),开放阅读框(ORF)长930bp,编码310个氨基酸,预测为卵壳蛋白,在抗生殖免疫方面发挥重要作用。对此重叠群设计引物,
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