论文部分内容阅读
目的：体外研究他克莫司(FK506)对重型再生障碍性贫血(SAA)患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞的抑制作用,SAA患者效应T细胞功能与临床的相关性,进一步探讨SAA的免疫发病机制。方法：取16例SAA患者骨髓10ml,经淋巴细胞分离液,分离提取单个核细胞。经免疫磁珠分选16例SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞,流式细胞术检测分选纯度在85%以上。计数分选的阳性细胞,以2×105/ml细胞浓度置于96孔板中,分IL-2组(接种6孔)、FK506组(接种7孔),孵育24小时后分别加入不同浓度IL-2、FK506,培养48小时后加入MTT混匀孵育4小时,离心后吸出培养液,每孔各加入二甲基亚砜(DMSO)摇匀后,酶联免疫检测仪测定各孔的吸光度值(A490nm)测培养孔细胞增殖。用淋巴分离液分离上述SAA患者骨髓T淋巴细胞,将上述所得单个核细胞后以5×105/ml细胞浓度接种于含RPMI-1640培养基的24孔板中,设空白对照组、IL-2组、FK506组、FK506+CsA组,共培养18小时后加入佛波酯(PMA)等活化4小时,用流式细胞仪(?)CD8+HLA-DR+T细胞内TNF-β蛋白表达水平；并进一步分析TNF-β表达量与外周血象及CD4+/CD8+T细胞比例的关系。结果：1.SAA患者效应细胞CD8+HLA-DR+细胞纯度均在85%以上。2.随着IL-2浓度的增加,IL-2组细胞出现不同程度的增殖,以IL-2浓度为20、200、2000u/ml组增殖明显,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。并且FK506可以抑制以上三种浓度IL-2的促增殖作用,差异有统计学意义(P<0.05)。3. CD8+HLA-DR+T细胞TNF-β平均表达量在空白组、IL-2组、FK506组、FK506+CsA组分别为：(66.61-16.2)%、(73.36±16.73)%、(47.78-20.09)%、(42.23±21.35)%,IL-2组明显高于空白对照组,FK506组和FK506+CsA组明显低于空白对照组,而FK506+CsA组与FK506组差异无统计学意义。4.空白组TNF-β表达量与患者临床血象中网织红细胞百分比、淋巴细胞比例及CD4+T细胞与CD8+T细胞比例有显著的相关关系,相关系数r分别为：-0.86、0.77、-0.9。结论：1.IL-2能促进SAA患者CD8+HLA-DR+T细胞增殖,FK506能抑制此增殖作用。2.IL-2能促进CD8+HLA-DR+T细胞分泌高水平的TNF-β, FK506能抑制其分泌；FK506联合CsA对CD8+HLA-DR+T细胞抑制作用与单用FK506作用相当。3.TNF-β表达量与CD4+/CD8+T细胞比例呈负相关,与患者外周血淋巴细胞比例呈正相关,与患者网织红细胞百分比呈负相关,再次提示TNF-β在CD8+T细胞对SAA患者骨髓的损伤中发挥重要作用。