鳗弧菌快速检测试纸条的研制

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鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是一种可引起鱼类高致死性出血性败血症的病原菌,给水产养殖业带来巨大危害和经济损失,迫切需要建立一种准确、便捷的鳗弧菌检测方法用于疾病的防控。目前文献已报道的鳗弧菌检测方法存在检测时间长、操作过程复杂等问题,无法应用于养殖渔场等基层单位。本课题基于抗体标记技术开发以胶体金、量子点及上转磷光材料作为标记物的快速免疫层析法检测鳗弧菌,为鳗弧菌病害的防控提供便捷的检测方法。本课题以实验室分离的一株鳗弧菌毒株MVM425灭活菌体为抗原,制备鳗弧菌单克隆抗体5G4-G4和5G4-B8。以胶体金作为标记材料对鳗弧菌单克隆抗体进行标记,制备出鳗弧菌胶体金快速检测试纸条。该试纸条具有良好的特异性,与弧菌属常见的病原菌无交叉反应,其检测限达到105CFU/ml。据文献报道以量子点和上转磷光材料作为抗体标记物,可以大幅度提高检测灵敏度,实现对病原微生物的微量和定量检测。本课题考察了核-壳型量子点材料CdSe/ZnS和上转磷光材料NaYF4:Yb, Er作为抗体标记物在鳗弧菌检测中应用的可行性。通过优化抗体与这两种材料的最佳结合量,获得量子点和上转磷光材料标记鳗弧菌单克隆抗体,并以斑点杂交验证其应用于鳗弧菌检测的可行性,为后续研发量子点及上转磷光检测试纸条奠定了基础。
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