核盘菌病毒SsDRV的5'末端克隆及侵染性全长cDNA克隆的构建

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:youyoucao_1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本论文以核盘菌弱毒菌株Ep-1PN为材料,对核盘菌弱毒菌株Ep-1PN中的核盘菌衰退相关RNA病毒(SsDRV)的基因组序列进行了修正、构建了侵染性载体构建并对该载体进行了初步的验证。   实验室前期构建的一个双元载体p1301-SsDRV,利用农杆菌介导转化技术转化盾壳霉。获得了105个转化子,PCR验证了T-DNA已成功导入到盾壳霉菌株ZS-1中。对转化子的菌落形态、菌丝生长速度、孢子产量、寄生致腐菌核等生物学特性进行了研究,结果表明导入SsDRV-cDNA未引起盾壳霉ZS-1出现显著的异常表型。采用RT-PCR可以检测到目的SsDRV-cDNA的mRNA,但未能检出dsRNA。通过对已知的SsDRV基因组进行分析,推测其5’末端序列可能存在未知的RNA片段。   提取核盘菌弱毒菌株Ep-1PN的总RNA,采用SMART(Switching Mechanism At5’end of the RNA Transcript,SMART)技术克隆了SsDRV基因组的5’末端还存在82 nt的RNA片段。SsDRV基因组全长为5500个核苷酸序列(不包括polyA),只有一个开放式阅读框(174nt-5274nt)。SsDRV的5末端含有一个帽子结构。进一步分析发现,SsDRV的基因组在5‘端存在着变异,其3’端含有polyA结构。对5’-UTR和3’-UTR进行二级结构预测,5’-UTR形成发夹结构,有一个AU富含区,3’-UTR形成类似tRNA结构。   分段扩增SsDRV的cDNA,分别连入pUH18的构巢曲霉的trpC启动子下游和trpC终止子的上游,得到SsDRV的全长cDNA侵染性载体pTSVH。利用电穿孔转化核盘菌的原生质体,将线性化载体pTSVH导入核盘菌Ep-1PNA367的染色体中,获得了9个转化子。对转化子的生物学特性进行了分析,发现转化子生长缓慢且致病力减弱。通过PCR检测证实核盘菌菌株Ep-1PNA367中含有SsDRV的cDNA;RT-PCR检测表明SsDRV的cDNA的mRNA,但是采用纤维素CF-11法未检测到SsDRV的复制体形式dsRNA。
其他文献
随着社会经济发展与城市规划建设理念的转变,对于山溪性河道的修复治疗,不仅需要满足人口较为集中区域的泄洪要求,同时还要具备一定的美观性或城市功能特征,具有相对较高的要求标
城市给排水工程的规划设计是城市竖向设计的重要内容,城市给排水工程规划设计前,需要做好各项调研工作,使得规划设计能够符合当地城市发展要求,并且以合理开发利用水资源为原则,对
烤烟是我国南方重要的经济作物,其在我省武夷山具有广泛的种植面积。本研究因地制宜地利用烤烟与早稻生育期重叠的特性,建立烟稻邻作系统,调查比较了烟稻邻作系统和水稻单作
卓越绩效模式是一种综合全面质量管理的实施细则和管理方法。现如今,很多企业在管理中都采取卓越绩效模式,这种模式是以系统的框架进行企业诊断、经营提升和咨询来提升企业的绩
进入新时期以来,我国经济水平不断提升,人民生活水平质量不断提高,原有的很多思路已经不再适应新时期的发展。为了更好的适应新时期多媒体技术的发展,满足人们精神文化增长的需求
在工业迅速发展的今天,煤矿企业远距离供电技术得到了普遍应用,并在煤矿井下供电系统中扮演着更加重要的角色,发挥着独一无二的作用。但煤矿井下远距离供电技术在使用中,经常
高油玉米是指那些含油率比一般品种(4.5%)高的玉米.目前,国内外所培育的高油玉米品种,其含油率一般在6.5—14%,而有些试验品系已高达20%。大约有85%的玉米油分集中在籽粒的
新城金矿新主井井筒净直径为φ6.7m,井口标高+32.9m(地表+32.7m),井底标高-1488.1m,井筒深度为1521m。该项目采用立井机械化配套设备施工,掘进爆破应用了中深孔光面爆破技术
6月2日晚,来自证监会的消息再次刷爆了VC/PE们的微信朋友圈。而5月27日证监会关于上市公司股东减持新政就像一枚重磅炸弹。VC/PE大咖们对于减持新规渐分成两派,针锋相对。一派认为,完善减持制度有利于鼓励长期投资和价值投资,另一派则认为,VC/PE躺着中枪,违反双创精神,打击实体经济。6月2日出台的针对创业投资基金锁定期和减持豁免政策,就是证监会根据国家双创精神,针对创业投资基金实际情况在市场化
当前,随着人民生活质量的日益提升,对食品提出了越来越严格的要求,因此,为了有效提高食品品质标准,应注重将无损检测技术应用到食品工业的可持续发展中,从而有效的掌握当前食品品质