论文部分内容阅读
季节性流感是严重危害人体健康与公共卫生安全的急性呼吸道传染性疾病,由流感病毒引起,主要分为甲、乙、丙、丁四个亚型,其中甲型流感病毒是导致季节性流感的主要因素,多次引起了世界性的大流行,严重危害人类社会的健康与安全。近年来,由于甲型流感病毒不断发生突变,导致流感的传播速度变快,每年都会在世界范围内造成规模较大的传播,发病率和死亡率也较高,而且目前对临床上使用的药物耐药的变异毒株也逐渐被报道,所以寻找新的药物靶点与治疗方案是科研人员迫在眉睫的工作。天然免疫是抵御病毒入侵宿主的第一道防线,流感病毒的复制与宿主的免疫应答强弱相关,参与调控抗病毒天然免疫的宿主蛋白不断被研究报道,宿主蛋白具有广谱抗病毒活性和不易突变的优点,可作为靶点参与筛选抗流感药物。鸟苷酸结合蛋白7(Guanylate-Binding Protein 7,GBP7)是属于鸟苷酸结合蛋白家族中的一员。GBP家族在人体中鉴定出有7个成员,最早报道是由干扰素γ诱导,分子量为67-69kDa之间,在结构上有高度同源性,均包含了一个N端末端的GTPase区域,并能结合与水解三磷酸鸟苷(GTP)。GBP家族在病原体入侵宿主后引起的天然免疫应答中扮演非常重要的作用,GBP7曾被报道在李斯特菌(Listeria monocytogenes)和分枝杆菌(Mycobacerium bo vis)入侵宿主时,抵御细菌感染保护宿主细胞。但是目前GBP7与病毒感染的相关性研究未见任何报道,而且GBP7在抗病毒天然免疫应答中所起的作用也不为人所知。我们的研究发现在甲型流感病毒感染的小鼠肺组织、人PBMC细胞、人呼吸道上皮细胞中,GBP7均可被大量诱导表达。我们通过CRISPR敲除技术,制备了 A549 GBP7敲除单克隆细胞系,发现敲除GBP7后流感病毒的复制明显抑制,进一步我们通过瞬时过表达GBP7,发现GBP7促进了流感病毒的复制。我们进一步的探索GBP7对于抗病毒免疫应答的调控作用,发现敲除GBP7上调了病毒诱导与Poly:I C刺激的I型干扰素(IFN-α,IFN-β),Ⅲ型干扰素(IFN-λ),促炎症因子(IL-6,IL-1β,TNF-α),趋化因子(IL-8,IP-10,CCL2,CCL5)的表达,过表达GBP7则抑制了病毒诱导与Poly:I C刺激的Ⅰ型与Ⅲ型干扰素、促炎症因子、趋化因子的表达;敲除GBP7上调了病毒诱导与Poly:I C刺激的NF-κB和JAK-STAT两条信号通路。我们还发现盐酸阿比朵尔诱导GBP7大量表达,盐酸阿比朵尔抑制流感病毒诱导的NF-κB信号通路与炎症因子的表达。综上所示,我们发现,甲型流感病毒诱导的GBP7蛋白促进了流感病毒的复制,并在抗病毒天然免疫应答反应中扮演了一个负性调控的作用。这为我们筛选抗病毒药物靶点提供了一个新的思路。