钙调素拮抗剂EBB抑制人肿瘤细胞侵袭迁移的体外实验研究

来源 :中国协和医科大学 中国医学科学院 北京协和医学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xsyangle
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本文首次就EBB对肿瘤细胞体外侵袭转移能力的影响进行了研究,并初步观察到EBB对线粒体超微结构产生的影响,发现EBB对肿瘤细胞凋亡有促进作用。本研究采用MTT实验测定药物敏感性,发现EBB对HT1080、ES-2、SKOV3、M21及EB-1等人肿瘤细胞系的IC50作用范围在2-10mg/L。人肿瘤细胞系恶性程度越高,IC50越大。应用Transwell小室进行细胞侵袭重建基底膜实验,经2、5和10ug/ml浓度EBB作用,HT1080、ES-2和SKOV3细胞的侵袭细胞数与药物浓度呈反比,侵袭抑制率与药物浓度呈正比。使用相同条件处理细胞系,采用单层细胞侵袭实验,结果与Transwell小室实验一致。同时采用划痕迁移实验,结果表明EBB能够抑制细胞的迁移。当含2、5和10μg/ml浓度EBB的无血清RPMI1640培养24h后,用Zymogrophy法分析MMP-2及MMP-9活性,显示MMP-2和MMP-9的活性均降低。以上实验结果证明,EBB能明显降低肿瘤细胞的侵袭和运动能力。   我们采用细胞流式仪分析表明EBB对肿瘤细胞有诱导凋亡作用。分别用2、5和10μg/ml浓度EBB处理HT1080、ES-2、M21细胞24h,各取1-9×107细胞,做超薄切片。电镜下观察到,EBB在IC10-IC50剂量时,细胞内线粒体均发生肿胀,甚至空泡变,同时使线粒体形态发生改变,嵴形态排列不规则,数量变少,胞浆中有脂滴和溶酶体出现,胞浆中溶酶体数目增多,细胞核未见凋亡小体。综上所述,我们可以初步得出EBB在体外可以抑制肿瘤细胞的侵袭迁移作用,并诱导肿瘤细胞的凋亡。但EBB对人肿瘤细胞体内侵袭转移及凋亡的作用以及作用的机制,还有待进一步研究。
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