禽网状内皮组织增生症是由禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）感染导致的肿瘤性传染病。REV主要侵害家禽的淋巴系统,引起严重的免疫抑制。近年来,流行病学调查发现REV感染在多个国家及我国鸡群中已相当普遍,同时疫苗中REV污染也时有报道,开展REV监测与净化对该病防控极为重要。REV可通过种蛋垂直传播,是种源需要净化的病毒之一,同时携带REV的SPF鸡胚用于生产弱毒疫苗会造成疫苗中污染REV。通过细胞病毒分离是检测REV的标准方法之一,该方法虽然准确但也存在缺点,一方面该方法耗时较长,另一方面该方法对人的操作能力和试验条件要求较高。目前已有多种分子生物学方法应用于REV的检测,如RT-PCR、荧光定量RT-PCR等,同样对人员操作水平和检测仪器以及操作环境等具有较高要求,不适于在基层推广,亟需建立一种适于基层现场的REV快速核酸检测方法。本研究基于重组酶介导等温核酸扩增（Recombinase aided amplification,RAA）技术,建立了一种用于检测REV核酸的荧光RAA方法。根据GenBank上REV全基因组序列,针对其pol基因保守区域设计了 4对引物和探针,通过凝胶RAA方法对相关引物进行筛选优化,选择出了最佳引物和探针,探索反应体系和反应条件并对其灵敏性、特异性以及可重复性进行实验比对。结果表明,本研究所建立的荧光RAA方法灵敏度为102 copies/μL,与TaqMan荧光定量PCR灵敏度相当,是普通PCR灵敏度的10倍。本方法仅能检测到REV核酸,与鸡马立克氏病病毒、禽白血病病毒、鸡传染性贫血病毒、禽戊型肝炎病毒以及禽腺病毒等病毒核酸均无交叉反应,特异性良好。为进一步探索建立的荧光RAA方法在不同应用情境的检测效果。首先,将不同剂量的REV掺入禽用弱毒疫苗,人为模拟制备了 REV疫苗污染,并采用了三种方法进行测试比对。结果表明,荧光RAA和荧光定量PCR方法均可检测到最低1 TCID50/1000羽份的REV污染,普通PCR仅可检测到103 TCID50/1000羽份的REV污染。随后,我们将REV接种SPF鸡胚,出壳后雏鸡采集肛拭子,通过不同方法进行REV排毒检测。结果表明,荧光RAA检测结果和荧光定量PCR检测结果完全一致。运用荧光RAA方法对各地区送检的疑似REV阳性样品进行检测,从15份样品中鉴定到2份REV阳性,与病毒分离鉴定结果一致;进一步对分离到的2株REVgp90基因进行了测序与分析,发现两株REV gp90同源性差别较大。综上所述,本研究建立了一种用于REV检测的荧光RAA检测方法,该方法具有灵敏度高、特异性好的优势,并且操作简便,方便快捷。本方法为REV的快速检测提供了有力的技术支持。