异基因骨髓移植（allo-BMT）是目前治疗恶性血液病、再生障碍性贫血，以及遗传性疾病等的最有效方法。但是，HLA完全相合供源严重不足，迫使人们转向HLA半相合allo-BMT研究。与HLA全相合allo-BMT相比，遗传上的差异加大，使得移植物抗宿主病（GVHD）发生率和严重程度明显增加，严重影响受者的生活质量，甚至导致死亡。目前普遍认为，移植物中的T细胞，在引发和放大GVHD病理过程中发挥重要作用，但供者T细胞同时又是移植物抗白血病（GVL）的效应细胞。因此，常规非特异性免疫抑制剂的应用，或者移植物中T细胞的去除，尽管明显降低了GVHD发生率，但白血病复发、移植失败和感染发生率却相应增加，如何诱导供者T细胞保留GVL效应，而又不引发GVHD，其核心问题是建立allo-BM的特异性免疫耐受。 免疫耐受是机体免疫系统在接触某种抗原后，所产生的对该抗原的特异性免疫无应答状态，它只针对耐受原具有特异性，而对于其它抗原仍具有反应性。目前的研究大多采用单克隆抗体，或CTLA4-Ig阻断B7／CD28、CD40／CD40L共刺激通路诱导免疫耐受，均显示出了初步的效应，但对于HLA半相合allo-BMT而言，这种免疫耐受的强度是不够的，有必要探索新的方法和组合。T细胞活化需要两种信号共同参与，第一信号是由TCR介导的抗原特异性信号，第二信号为共刺激信号。T细胞激活的双信号理论，为我们联合应用TJU103和CTLA4-Ig调节信号传递，诱导免疫耐受奠定了理论基础。TJU103是一种异烟腙类小分子有机化合物，能够特异性地与CD4分子的CDR3区结合，阻断CD4／MHC-Ⅱ的相互作用。体内外研究证实TJU103能够抑制超抗原诱导的CD4+T细胞的活化、增殖和炎性细胞因子的分泌。动物体内应用能够明显延长异基因小鼠皮肤移植存活时间，但TJU 103能否与CTLA4一Ig联合在诱导免疫耐受中发挥作用，尚需进一步研究。 本研究根据T细胞激活的双信号理论，选择人外周血单个核细胞为研究对象，在受者正常组织抗原作为耐受原的条件下，联合应用TJU103和CTLA4一Ig作为干预因素，通过HLA半相合供受者单相混合淋巴细胞反应（MLR）体系，进行了体外对照性研究。利用供者T细胞活化、增殖和细胞因子分泌等效应功能变化作为评价指标，观察了TJU 103联合CTLA4一Ig应用，在诱导供者T细胞免疫耐受中的作用，为临床HLA半相合移植保留GVL、减轻GVHD提供理论和实验依据。 实验方法 L TJU103或CTLA4一1g单独应用对供者T细胞增殖活性的影响 以亲缘HLA半相合健康供者（父母巧例，子女3例，同胞2例）外周血单个核细胞（P BMC）为反应细胞。急性白血病完全缓解期患者正常PBMC为刺激细胞和耐受原，体外建立HLA半相合供、受者单相混合淋巴细胞培养（MLC）体系，分别取100匹反应细胞和刺激细胞接种%孔培养板，每个样本接种5个复孔，在37℃、体积分数为5%的coZ条件下培养24小时后，实验组各孔分别加入各自不同浓度（1林g/ml、10林g/ml、.50林留ml、1 00林g/ml）的TJU 1 03和CTLA4一19，反应细胞和刺激细胞组为对照组。相同条件下继续培养5天，培养结束前6h加入20林L浓度为smg/ml的MTT液，离心培养板，弃上清100林L，加入等量DMso，震荡5分钟，酶标仪测492nm处吸光度值（A492）。MTT法检测供者T细胞在单相MLC体系中的增殖反应，观察单独应用TJU103或CTLA4一Ig对供者T细胞增殖活性的影响。计算淋巴细胞增殖抑制率。 淋巴细胞增殖抑制率（%）=（1一实验组A御对照组A值）xloo%。 2、TJU103联合CTLA4一1g应用对供者T细胞增殖活性的影响 相同方法体外建立HLA半相合供、受者单相MLC体系。根据方法一的结果，固定一种TJU 103浓度，分别与4种不同浓度cTLA4一Ig （1林g/ml、10林留血1、50林g/ml、100林留ml）联合，加入MLe体系，利用MTT法检测供者T细胞在MLC体系中的增殖反应，根据单相混合淋巴细胞增殖反应的结果和淋巴细胞增殖抑制率，筛选TJu 103和cTLA4一Ig一4一联合应用的最佳组合，观察联合应用TJu 103和cTLA4一Ig对供者T细胞增殖活性的影响。 3、TJu103联合cTLA4一Ig应用对供着T细胞特异性增殖和细胞毒活性的影响 以供者单个核细胞为反应细胞，取等量丝裂霉素C灭活的受者单个核细胞为刺激细胞和耐受原，体外建立单相MLC体系。在37℃、体积分数为5%的COZ条件下培养24小时后，实验组加入TJU103和cTLA4一Ig在6孔培养板中行初次混合淋巴细胞培养，继续培养48h后收集细胞转移到%孔板作为反应细胞，加入不同刺激细胞后行再次混合淋巴细胞培养72h，MTT法检测各组淋巴细胞的增殖反应。根据刺激细胞的不同，实验可分为以下3组:①刺激细胞为同源受者单个核细胞;②刺激细胞为受者原代白血病细胞;③刺激细胞为第三方供者单个核细胞，同时设相应的对照组。 以上述初次混合淋巴细胞培养72h后的供者单个核细胞为效应细胞，新鲜分离的同源受者单个核细胞和第三方供者单个核细胞，以及解冻的受者原代白血病细胞分别作为靶细胞，接种%孔板，每个标本设5个复孔，各加入浓度为smg八nl的MTT液20匹，培养6小时后弃去100匹培养液，加入与培养液等量的DMSO，震荡10分