目的：利用人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因启动子的组织特异性，构建在人肿瘤细胞中特异性表达并携带肿瘤抑制基因p53的逆转录病毒载体，为进一步研究肿瘤基因治疗提供物质基础。 方法：一、我们通过大肠杆菌感受态细胞JM109，转化所收集的质粒逆转录病毒载体pLHCX、含人端粒酶逆转录酶基因启动子（hTERT）质粒phTERT-1uc、含1.8kb wtp53基因的质粒pCMV-Neo-BamH-wtp53，提取质粒DNA，分别酶切鉴定。二、质粒的构建：phTERT-luc酶切得到hTERT基因片段，插入到酶切后的pEGFP-N₂的载体中，构建phTERT-EGFP-N₂，再将phTERT-EGFP-N₂酶切，获得hTERT启动子和EGFP基因片段，插入到经酶切去除CMV IE启动子的pLHCX载体中构建完成pLHCX-hTERT-EGFP。将质粒pCMV-Neo-BamH-wtp53酶切后获得1.8kb的wtp53片段，插入经酶切的pEGFP-C₁质粒，筛选正向插入的pEGFP-wtp53质粒；将phTERT-1uc酶切，得到hTERT基因片段，插入到酶切后的pEGFP-wtp53的载体中，获得质粒pEGFP-hTERT-wtp53，最后将pEGFP—hTERT-wtp53酶切，获得hTERT启动子和wtp53基因片段，插入到经酶切去除CMV IE启动子的pLHCX载体中，获得质粒pLHCX-hTERT-wtp53。三、pLHCX-hTERT-EGFP质粒的表达特异性：以pLHCX-hTERT-EGFP、PBS分别利用脂质体介导转染端粒酶阳性的人大肠癌细胞系SW620和端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞系MRC-5，通过倒置荧光显微镜观察两者绿色荧光强度和流式细胞仪测定分析两者转染效率。四、wtp53mRNA和p53蛋白的表达的检测：将pLRCX-hTERT-wtp53瞬时转染p53突变的大肠癌细胞系SW620，通过RT-PCR和流式细胞术证实p53mRNA和p53蛋白的表达。 结果：一、pLHCX、phTERT-1uc pCMV-Neo—BamH-wtp53质粒的鉴定：根据质粒图谱，赠送的质粒酶切后出现相应片段，与质粒图谱均一致，故所收集的质粒是pLHCX、phTERT-1uc、pCMV-Neo—BamH-wtp53质粒无误。二、质粒的