目的:构建负载双片段survivin shRNA的腺病毒载体,体外转染人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3,研究其对PC-3细胞survivin基因的转录、翻译及对PC-3细胞凋亡和细胞增殖的影响。方法:分别设计2条靶向survivin基因的shRNA,克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后回收、连接、转化、克隆,构建负载2条survivin shRNA的RNA干扰重组腺病毒载体。提取环状重组病毒基因组进行PCR、酶切鉴定后,HEK 293A包装细胞包装成病毒,并扩增到所需滴度。重组腺病毒转染人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株。同时设立阴性序列腺病毒转染对照组和空白对照组。转染48小时后分别收集各组细胞。行RT-PCR、Western blotting、细胞记数、AnnexinⅤ与PI双染色法细胞凋亡分析等检测。结果:酶切鉴定、测序分析证实负载双片段survivin shRNA腺病毒载体构建成功。转染PC-3细胞48小时后,重组腺病毒转染组、阴性序列转染对照组、空白对照组survivin基因mRNA表达强度分别为9.63%±0.72%、92.20%±6.20%和96.22%±3.74%;细胞survivin蛋白表达强度分别为2.33%±0.63%、53.20%±5.62%和56.63%±4.57%;PC-3细胞凋亡率分别为15.86%±2.39%、6.25%±1.78%及5.32%±1.35%;重组体腺病毒转染组与两对照组相比差异均有显著性意义(p<0.05),而两对