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目的:探讨lncRNA MEG3对肝内胆管癌RBE细胞株耐药性的影响。方法:(1)构建MEG3过表达质粒,通过阳离子复合物-瞬时转染法,转染质粒于胆管癌RBE细胞株中,利用共聚焦显微镜观察转染结果;(2)应用Real-Time PCR检测RBE细胞株中MEG3的表达情况,以及转染前与转染后RBE细胞中耐药相关基因ABCG2、MRP1表达量的差异;(3)应用Western-Blot法检测RBE细胞中耐药蛋白ABCG2、MRP1转染前后表达的不同;(4)MTT法测定转染质粒48h后,各个组中加入不同浓度的阿霉素继续培养两天,观察RBE细胞对阿霉素药物敏感性的影响。结果:1.共聚焦显微镜下观察,目的质粒组(pcDNA-M985)转染效率为(61.3±3.7)%,空载质粒组(pcDNA-M98)转染效率为(83.2±2.6)%;空白对照组(MOCK)转染效率为0,表明转染成功,转染效果满意可以进行后续实验;2.Real-Time PCR结果显示,与转染前的MEG3(0.37±0.02)相比,转染后MEG3表达量显著上调,转染后MEG3的相对表达量为(6.23±0.01);质粒转染后,与MOCK组(ABCG2,1.09±0.01;MRP1,1.07±0.02)相比,pcDNA-M985组耐药基因ABCG2、MRP1表达量显著降低(ABCG2,0.55±0.01;MRP1,0.27±0.02),其差异具有统计学意义(P<0.01)(图3-1、3-2),而pcDNA-M98组(ABCG2,1.03±0.04;MRP1,1.05±0.01)与MOCK组相比,差异无统计学意义(P>0.05);3.Western-Blot结果显示,与MOCK组(ABCG2灰度值为329±3.91;MRP1灰度值426±2.80)相比,转染MEG3后pcDNA-M985组耐药相关蛋白ABCG2、MRP1蛋白表达量显著降低(ABCG2灰度值为191±2.13;MRP1灰度值为29±1.47),其差异具有统计学意义(P<0.01),而pcDNA-M98组(ABCG2灰度值为410±3.96;MRP1灰度值为382±4.28)与MOCK组相比,差异无统计学意义(P>0.05);4.利用MTT法检测不同浓度的阿霉素对不同组别细胞生长抑制率的影响,结果发现阿霉素对细胞的生长抑制效应呈剂量依赖性:随着阿霉素浓度的增加,对细胞的生长抑制作用越强,并且在0.5g/L时,其对各组细胞均有较强的抑制作用。与MOCK组生长抑制率(43.15±3.67)%相比,pcDNA-M985组生长抑制率显著增高为(61.97±6.14)%,其差异显著性明显(P<0.01),而pcDNA-M98组抑制率(45.83±4.37)%与MOCK组相比,差异无显著性(P>0.05),进一步证实过表达MEG3不仅抑制ABCG2、MRP1基因及蛋白表达,也提高了RBE细胞的药物敏感性,进一步降低了肿瘤细胞的耐药作用。结论:1.LncRNA MEG3过表达质粒可以成功转染RBE细胞株;2.RBE细胞中,MEG3过表达可以明显降低耐药相关基因ABCG2、MRP1及蛋白的表达;3.RBE细胞株可能是通过抑制ABCG2、MRP1基因及其蛋白的表达,降低了癌细胞对药物的外排作用,增加了RBE细胞内作用药物浓度,从而提高了肿瘤细胞对阿霉素的药物敏感性。