丁酸梭菌C2菌株对鮸鱼肠道微生态调控作用与机理研究

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本课题以从鸡肠道分离的丁酸梭菌C2菌株为研究对象,在对其进行生化和分子生物学鉴定的基础上,研究了该菌株抗性产酶特性、抑茵特性;并以鮸鱼为试验动物,研究了该菌株对其生长、消化酶、体液免疫、肠道微生态调控效用、与果寡糖的协同作用及相关的机理。主要研究结果如下:1、通过对C2菌株的菌落形态、生化及分子生物学的鉴定,确定该菌株为丁酸梭菌。2、试验研究了丁酸梭菌C2菌株对温度、胆酸盐及抗生素的耐受性。结果表明,C2菌株在100℃的条件下,至少可以存活10min;与氯霉素、青霉素、先锋Ⅵ、乙酰螺旋霉素可以共同的使用,而不会影响丁酸梭菌的活性;在胆酸盐浓度为5mg/ml时,能较好地存活。3、滤纸片琼脂平板扩散法抑菌结果表明,该菌株可以有效地抑制迟缓爱德华氏菌、鳗弧菌和嗜水气单胞菌,抑菌效果要优于硫酸链霉素(P<0.05);与枯草芽孢杆菌相比较,在12、18、24、36、48h五个时间段中,丁酸梭菌C2菌株和枯草芽孢杆菌对迟缓爱德华氏菌的抑制差异不显著(P>0.05);在12、18、24h三个时间段里,对鳗弧菌的抑制作用大于枯草芽孢杆菌(P<0.05),但是从36h起两者对鳗弧菌的抑制没有差异;对嗜水气单胞菌的抑制,在12h,枯草芽孢杆菌高于丁酸梭菌C2(P<0.05),而在随后的时间内,两者差异不显著。4、在构建鮸鱼肠道上皮细胞模型的基础上,进行了黏附试验。结果表明,该菌株可以降低鳗弧菌在鮸鱼肠道上皮细胞的黏附,而且活菌要优于灭活菌。丁酸梭菌C+2对鮸鱼肠道上皮细胞的黏附率为7.39±1.85,低于鳗弧菌(P<0.05);对细胞的损伤率为1.02±0.35,显著低于鳗弧菌对细胞的损伤率(P<0.05);黏附后丁酸梭菌组对细胞的成活率的影响与正常对照组比较,差异不显著;当丁酸梭菌C2、鳗弧菌与肠道上皮细胞共同培养时,使鳗弧菌的黏附率下降7.03%(P<0.05);排斥试验与替代试验表明,丁酸梭菌C2可以使鳗弧菌的黏附率分别降低8.97%和6.02%。5、在本试验条件下,丁酸梭菌C2菌株可以改善鮸鱼的生长。随着丁酸梭菌C2添加量的增加,日增重、特定生长率在最高剂量组(109CFU g-1)分别达到1.62±0.36g/D,0.58±0.09%,显著高于对照组(P<0.05);而饵料系数降低为1.89±0.39,显著低于对照组(P<0.05)。6、该菌株可以提高肠道鮸鱼消化酶的活性。在添加量为109CFU g-1时,肝胰脏淀粉酶活性明显增强,达到4200.0±98.75U/g(P<0.05);在幽门盲囊和前肠部位,淀粉酶的活性在添加量大于105CFU g-1时,其活性都显著高于对照组(P<0.05);后肠淀粉酶活性,在107CFU g-1显著高于对照组(P<0.05)。蛋白酶的活性在胃、幽门盲囊和前肠没有随着丁酸梭菌的添加而发生显著的变化,在后肠蛋白酶活性在添加到109CFU g-1时,显著增加(P<0.05)。脂肪酶的活性没有随该菌株添加量的增加而发生显著变化。7、体液免疫的试验数据表明,添加丁酸梭菌C2菌株可以提高鮸鱼血清和体表粘液溶菌酶活性,在添加109CFU g-1时,显著高于对照组(P<0.05);同时可以提高酸性磷酸酶和酚氧化酶的活性(P<0.05);增加血浆中的IgM浓度(P<0.05)。8、丁酸梭菌C2菌株在鮸鱼肠道可以存活。当以108CFU g-1剂量饲喂鮸鱼时,活菌计数显示该菌株在前、中、后肠分别为6.43±0.32、6.36±0.22、7.28±0.28 log CFU g-1。9、假单胞菌是鮸鱼肠道的优势菌群。丁酸梭菌C2的添加可以影响其肠道的菌群结构。促进双歧杆菌生长,抑制大肠杆菌、肠产气杆菌和短杆菌,有可能促进发光杆菌的增长。同时对厌氧菌总数影响不显著(P>0.05),显著降低了好氧菌总数(P<0.05)。10、丁酸梭菌和果寡糖具有协同作用。当两者共同添加到日粮当中时,可以显著提高鮸鱼生长性能和日增重,降低饵料系数(P<0.05);显著减少粪氮排泄(P<0.05),有降低养殖水体中氨氮的趋势;对可溶性磷的影响不显著。
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