淫羊藿的营养组成及抗氧化、抑制骨髓瘤细胞增殖活性分析

来源 :陕西师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hummerandy
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淫羊藿是我国特有的药食两用植物。为了给淫羊藿在食品工业中的应用提供科学支撑,促进淫羊藿资源的科学开发和综合利用,本研究系统分析了淫羊藿的营养组成以及抗氧化、抑制骨髓瘤细胞增殖活性。本论文优化了淫羊藿多糖的定量分析方法,建立了淫羊藿蛋白质的快速、无损检测方法,对于淫羊藿资源的开发利用以及质量控制具有较强的现实意义。研究了淫羊藿不同组织器官的营养成分,最后探讨了淫羊藿黄酮类化合物的抗氧化作用及其对DNA损伤的保护作用和对骨髓瘤细胞的抑制作用,为淫羊藿资源的深度开发提供了依据。本研究主要得到以下结果:(1)建立了一种特异、准确、重复性好、灵敏度高的苯酚-硫酸法,可用来定量测定淫羊藿中的多糖含量;采用该方法测定了中国市场上淫羊藿中的多糖含量。该方法优选半乳糖作为标准单糖,检测波长定为486nm。通过进行单因素试验正交试验(L9(34))获得了显色反应的最优条件(显色温度:20℃,5%苯酚添加量:0.3mL,浓硫酸添加量:3.5mL,显色时间:20min;样品添加顺序:苯酚-样品-浓硫酸)。多糖样品在显色反应2h内样品显示了较高的稳定性。标准曲线的线性工作范围为5.00-60.00μg/mL,且回归方程的相关系数为0.999。LOD和LOQ分别为1.65和5.00μg/mL。回收率、日内精密度、日间精密度和准确度的范围分别是97.43%-103.80%,0.73%-3.48%,1.21%-2.75%,97.74%-101.62%。用建立的显色方法测定了从全国不同省份收集的26个淫羊藿样品中的多糖含量,发现样品间存在很大的差异。(2)建立了一种快速、无损、精确测定淫羊藿蛋白质含量的近红外漫反射光谱分析法。蛋白定标模型的建立依次通过了二阶导数处理、标准多元离散校正散射处理、主成分分析聚类处理和改进最小二乘法回归,由此得到的定标模型的预测效果能很好的预测验证集的数据以及进行样品的分析。定标决定系数为0.923,交互验证标准差与交互验证相关系数分别0.554与0.717。近红外光谱分析法的测定结果与化学分析法(凯氏定氮法)的测定结果无显著差异,两种方法测定值的相关性较高(R2=0.9339)。重复性试验表明,近红外光谱分析法的相对标准偏差达到0.937%。采用该方法首次测定了8种淫羊藿中蛋白质的含量。(3)本研究中选取淫羊藿不同组织作为实验材料,进行了营养成分、活性物质以及重金属含量的测定。结果表明,淫羊藿叶中的水溶性(2.26%)和水不溶性灰分(5.23%)最高,蛋白质含量(10.46%)、必需氨基酸含量(43.78mg/g)和AAS(139.32%)值最高;茎富含粗脂肪(5.67%)和粗纤维(48.22%);淫羊藿根中的多糖含量(1.87%)、半必需氨基酸(His+Arg)的含量(16.36mg/g)、E/T值(31.51%)最高,同时总黄酮含量最高,达12.27%。异亮氨酸和亮氨酸成为淫羊藿不同组织中的第一或第二限制性氨基酸,大量元素(Mg、K、Ca)和微量元素(Mn、Fe、Zn)的检出率均为100%,且均满足要求,As元素和Pb元素的检出率同样为100%,叶中Pb元素含量超出行业标准中规定的检测限量,Cd和Hg元素未检出。(4)评价了淫羊藿提取物的抗氧化活性、DNA损伤保护活性及其对骨髓瘤细胞增殖的抑制活性。通过淫羊藿不同组织黄酮类化合物对DPPH·和ABTS·+的清除能力大小的评价,得到了清除DPPH·的顺序是:叶>根>茎,清除ABTS·+的顺序是:根>叶>茎,淫羊藿不同组织清除DPPH·和ABTS·+的能力随着浓度的增加呈现正相关的趋势,且同一浓度下,根的抗氧化能力一般比叶和茎强;淫羊藿不同组织黄酮类化合物对DNA氧化损伤的保护作用是通过琼脂糖凝胶实验来进行的,本研究中通过对相同浓度的淫羊藿不同组织黄酮类化合物对pBR322质粒DNA氧化损伤的保护作用,得到了淫羊藿不同组织黄酮类化合物均具有保护pBR322质粒DNA损伤的作用,保护程度由强到弱的顺序依次为:根>叶>茎;淫羊藿不同组织黄酮类化合物对骨髓瘤细胞的增殖抑制作用是采用MTT法来进行的,OD值的大小间接反映了抑制作用的强弱。通过淫羊藿不同组织中梯度浓度的黄酮类化合物抑制骨髓瘤细胞增殖作用的研究,可以得到各组织不同浓度的黄酮类化合物对骨髓瘤细胞均有增殖抑制作用,且抑制作用与各浓度呈现正相关,相比之下,同浓度下根对骨髓瘤细胞的增殖抑制效果最强。
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