论文部分内容阅读
植物SUPERMAN类锌指蛋白是C2H2型锌指蛋白中的单锌指蛋白,该类蛋白只含一个锌指结构域,具有N端保守序列QALGGH和C端富含亮氨酸的保守序列L(I)DLXIR(K)L,其主要在植物花、侧根、种子和胚发育过程起重要作用。最近研究表明SUPERMAN基因可能参与了雌雄异株植物性别决定和分化调控。因此为了研究SUPERMAN基因是否参与了石刁柏性别决定及其分化过程,本文以雌雄异株植物石刁柏为材料,根据已经报道的SUPERMAN类单锌指蛋白的氨基酸保守序列设计引物,利用RACE技术从石刁柏中分离了一个SUPERMAN类单锌指蛋白的基因AoSUP,并对AoSUP的基因序列、蛋白结构、雌雄株不同营养组织表达差异进行了初步分析。结果如下: 1、利用RACE技术扩增了AoSUP基因的cDNA全长序列并进行了初步分析,结果表明:AoSUP的保守区片段为长度409 bp,其cDNA全长1052 bp,5’-UTR区长63 bp,3’-UTR区长213 bp,该全长序列中包含一个长度为786 bp的ORF(开放阅读框),该阅读框编码261个氨基酸的多肽链,其氨基酸序列包含该类单锌指蛋白的核心锌指结构域OALGGHM*R*R,以及C端的L/IDLELRLG保守序列。AoSUP的氨基酸序列同其他植物11种代表性SUPERMAN类基因氨基酸序列比对和NJ进化树结果显示,AoSUP同该类蛋白的氨基酸相似度介于15%到49%之间,其中相似度最高的是拟南芥的KUN基因的氨基酸序列,为49%。 2、利用ProtParam、ProtScale、SOPMA、NetPhos2.0 Serve等软件分析对AoSUP基因蛋白生物信息学分析表明:AoSUP蛋白氨基酸相对分子量为28361.0,等电点(pI)为10.16;AoSUP蛋白多肽链亲水性氨基酸均匀分布于整个蛋白质中,且多于疏水性氨基酸,因此AoSUP属于亲水性蛋白;AoSUP氨基酸序列的二级结构主要为a-螺旋、β-折叠和β-转角,所占比例分别为27.20%、12.64%和5.36%;AoSUP氨基酸序列共有17个磷酸化位点,其中11个丝氨酸(Ser)位点,3个苏氨酸(Thr)位点,3个酪氨酸(Tyr)位点。 3、利用RT-PCR技术对AoSUP基因在雌雄株的表达模式分析表明,AoSUP基因在石刁柏雄株和雌株的根、茎、叶和花中均有表达,茎、叶和花中的表达量基本一致,而在根中的表达量明显低于茎、叶和花中的表达量。从性别间来看,AoSUP基因在雌雄株间的表达模式基本一致,没有性别差异,因此推测该基因可能没有参与石刁柏的性别决定及分化过程。