【摘 要】
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甜樱桃（Prunus avium L.）营养丰富,色泽鲜丽,是最受消费者喜爱的温带水果之一,但在采后贮藏过程中,由于皮薄汁多易发生失水、软化、褐变及病原真菌侵蚀腐败的现象,导致果实腐烂,其中软腐病和褐腐病是甜樱桃采后主要病害之一,因此对两种病害进行病原菌的分离鉴定及防治具有重要的研究意义。本试验以在山东市场占有率较高的“美早”甜樱桃为研究对象,从山东泰安地区采集具有软/褐腐病特征的“美早”甜樱桃进
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甜樱桃（Prunus avium L.）营养丰富,色泽鲜丽,是最受消费者喜爱的温带水果之一,但在采后贮藏过程中,由于皮薄汁多易发生失水、软化、褐变及病原真菌侵蚀腐败的现象,导致果实腐烂,其中软腐病和褐腐病是甜樱桃采后主要病害之一,因此对两种病害进行病原菌的分离鉴定及防治具有重要的研究意义。本试验以在山东市场占有率较高的“美早”甜樱桃为研究对象,从山东泰安地区采集具有软/褐腐病特征的“美早”甜樱桃进行病原菌分离,利用形态学和分子生物学技术鉴定,并将分离的病原菌菌株回接甜樱桃进行致病性验证;针对软/褐腐病原菌,从健康甜樱桃本身筛选优质拮抗菌株,开展生防研究。得出以下结果:（1）从60颗山东泰安市腐败“美早”甜樱桃样品中分离得到21株真菌,筛出RF与HF致病真菌导致的甜樱桃腐败特征与甜樱桃软/褐腐病发病一致,反接验证试验表明菌落RF致病性强于菌落HF致病性。鉴定RF菌株为匍枝根霉（Rhizopus stolonifer）,HF菌株为美澳型核果褐腐病菌（Monilinia fructicola）。生物学特性研究得出匍枝根霉在以酵母膏为氮源的SDA培养基、25℃、p H=6及黑暗条件下菌落生长和产孢量最佳。（2）从甜樱桃内部分离得到内生拮抗细菌L-16和L-21,经形态学鉴定、生理生化指标及16S r DNA序列分析鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）和特基拉芽孢杆菌（Bacillus tequilensis）。拮抗菌L-16发酵液抑菌条件的优化中,得出在发酵温度37℃、发酵p H=6.5及发酵时间96 h的条件下,对病原菌RF的抑制效果最好。将拮抗菌L-16进行活体实验来验证对病原菌RF的生防效果,结果表明:发酵液的拮抗效果优于菌悬液和发酵上清液的拮抗效果;接种浓度为1×10~9CFU/m L的发酵液48 h后,甜樱桃腐败率为20.58%,病斑直径为6.77±1.41 mm,病情指数为13.97%,与对照组差异显著（p<0.05）。（3）拮抗菌L-16与病原菌RF的相互作用:体外实验通过扫描电镜（SEM）得出拮抗菌处理后会导致病原菌菌丝破裂,孢子囊发生畸形和凹陷。体内实验通过扫描电镜（SEM）得出拮抗菌会在伤口部位大量繁殖,紧紧依附病原菌菌丝,可能是营养与空间竞争作用。（4）拮抗菌L-16的抑菌物质对温度、p H、紫外线及酶的稳定性研究结果表明:菌株L-16抑菌物质在p H=7时,抑菌活性最高;在紫外线不同照射时间下,抑菌活性基本变化不大,具有较好的紫外稳定性;在不同的温度下,室温下抑菌效果最好,随着温度的升高,抑菌活性逐渐降低,当抑菌物质在60℃以后生物活性将完全消除;在不同酶的处理下,与CK相比,L-16拮抗菌抑菌物质活性有显著差异,可以初步的判定L-16拮抗菌产生的抑菌物质可能为蛋白类或脂肽类物质。对拮抗抑菌物质进行盐析,得出当硫酸铵饱和度为80%时,上清液无抑菌活性,沉淀的物质抑菌活性最佳。
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