食物过敏是一个危害全球的公共卫生问题,有研究认为,鸡蛋是第二大过敏原食物。目前已知的鸡蛋过敏原主要有卵白蛋白、卵类黏蛋白、卵转铁蛋白和溶菌酶。卵类黏蛋白因其热稳定性好,耐消化,被认为是一种致敏性很高的鸡蛋过敏原。但是,最近有研究表明,卵转铁蛋白的致敏性与卵类黏蛋白相似,值得我们关注。由于卵转铁蛋白有较强的铁离子螯合能力,而且与铁离子螯合后卵转铁蛋白的三级结构发生明显改变。因此,卵转铁蛋白与铁离子螯合后其致敏性的变化也值得关注。本论文以鸡蛋卵转铁蛋白为研究对象,开展了鸡蛋卵转铁蛋白及其铁螯合物致敏性的评估,主要研究内容包括:①鸡蛋卵转铁蛋白的分离纯化及其铁螯合物的制备;②通过小鼠实验模型对卵转铁蛋白及其铁螯合物的致敏性进行评价;③基于树突状细胞抗原加工的方法对鸡蛋卵转铁蛋白及其铁螯合物的致敏性进行评价。研究的主要方法、结果及结论如下。1.先通过CM Sepharose Fast Flow阳离子交换层析结合经基磷灰石疏水层析的方法,制备得到鸡蛋卵转铁蛋白。然后将卵转铁蛋白溶液置于NTA-Fe3+溶液中透析,制备得到了较高纯度的卵转铁蛋白铁螯合物。经尿素电泳鉴定,卵转铁蛋白及其铁离子螯合物的纯度分别达到98%与68%。2.通过小鼠模型评价了卵转铁蛋白及其铁螯合物的致敏性。小鼠空肠组织切片结果表明,经卵转铁蛋白及其铁螯合物免疫的小鼠均出现肠道过敏反应,但是并没有引起全身性的过敏反应症状。与卵转铁蛋白组小鼠相比,卵转铁蛋白铁螯合物组小鼠血清中的sigG与sigGl水平,脾细胞增殖水平,以及与食物过敏相关的细胞因子IFN-γ,均显著下调(P<0.001),这些数据提示,卵转铁蛋白及其铁螯合物的致敏性较低,并且卵转铁蛋白铁螯合物的致敏性低于卵转铁蛋白。3.体外培养小鼠骨髓来源的树突状细胞,并测定了树突状细胞对过敏原的摄取率。结果显示,树突状细胞对卵转铁蛋白的摄取率显著低于对卵转铁蛋白铁螯合物的摄取率(P<0.01)。该结果提示,树突状细胞对过敏原的摄取率与过敏原的致敏性并非正相关。4.在使用组织蛋白酶D模拟树突状细胞对过敏原的加工实验中,卵转铁蛋白与其铁螯合物均无显著性的变化,表明单独使用组织蛋白酶D并不能模拟树突状细胞对过敏原的加工,应考虑使用多种复合酶,同时提示我们,为了更好地了解树突状细胞对过敏原的加工与食物过敏的关系,应该进一步研究树突状细胞将加工后的过敏原呈递给T细胞后所引发的T细胞反应类型。