【摘 要】
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目的通过用邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)及乙烯雌酚(DES)染毒孕期(GND12-PND3)SD大鼠,统计子代雄鼠隐睾率,测血清睾酮量,测睾酮合成通路中关键酶:细胞色素P450胆固醇侧链
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目的通过用邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)及乙烯雌酚(DES)染毒孕期(GND12-PND3)SD大鼠,统计子代雄鼠隐睾率,测血清睾酮量,测睾酮合成通路中关键酶:细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)m RNA,急性调节蛋白酶(Star)m RNA和3β类固醇脱氢酶(3β-HSD)m RNA的相对表达量,从而初步探究环境内分泌干扰物致子代大鼠隐睾的机理。方法购买的SPF大鼠在屏蔽环境动物实验室内适应性饲养1周后,雌雄大鼠按2:1的比例合笼,次日8点将雌鼠逐一阴道涂片后显微镜下观察,发现精子当日记为孕期零天(GND0)。将怀孕母鼠取出放单独一笼,随机分为空白对照组,玉米油组,DEHP低剂量组,DEHP中剂量组,DEHP高剂量组,DES组6个组别,每组8只。玉米油组:喂饲1ml玉米油/d,DEHP低剂量组:喂饲DEHP100mg/kg/d+1ml玉米油/d,DEHP中剂量组:喂饲DEHP500mg/kg/d+1ml玉米油/d,DEHP高剂量组:喂饲DEHP750mg/kg/d+1ml玉米油/d,DES组:喂饲DES100mg/kg/d+1ml玉米油/d。正常对照组:常规喂饲饲料,不给于其他处理。在雌鼠孕12天开始按照上述剂量给予孕鼠灌药至仔鼠生后3天。待F1代鼠生后30天时,处死子代雄鼠。统计各组子代雄鼠数量及隐睾仔鼠数目,显微镜下观察睾丸组织学变化,Real-time PCR检测雄激素关键酶P450scc酶,Star酶和3β-HSD酶的m RNA相对表达量。结果孕期母鼠在窗口期(GND12-PND3)暴露于DEHP低,中、高剂量和DES都可引起生后30天部分SD大鼠隐睾。且随着DEHP剂量的升高呈现隐睾发生率增加,低剂量组的隐睾率(22.6%)、中剂量组隐睾率(38.5%)、高剂量组隐睾率(46.1%)、DES组隐睾率(43.3%)与正常组相比都有统计学意义(P<0.05)。DEHP低、中、高剂量组及DES组染毒孕鼠后其仔鼠血清睾酮的浓度都出现减少趋势,并且呈现剂量依赖性。DEHP中、高剂量组和DES组与正常对照组比较,睾酮浓度明显降低,差异有统计学意义﹙P<0.05﹚,但低剂量组其睾酮浓度与正常对照组及玉米油组比较差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组和玉米油组睾丸组织学显示:生精细胞规整,生精小管之间无Leydig细胞聚集。DEHP低剂量组睾丸组织学无特异变化。但DEHP中、高剂量组可见Leydig细胞(间质细胞)增生,且聚集成团。DES组未见明显Leydig细胞聚集,但有生精细胞减少,松散稀疏。DEHP低、中、高剂量组P450scc,3β-HSD的m RNA的表达都减少。DEHP高剂量组P450scc和3β-HSD与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。DEHP各剂量组Star酶的m RNA的表达量增多且都具有统计学意义。DES组三种酶的表达量都减少,但其中Star酶的m RNA的表达量与对照组比较差异无统计学差异。结论1.胚胎性发育关键期一定剂量DEHP和DES的暴露都会导致SD大鼠隐睾。2.DEHP中、高剂量组和DES组SD大鼠Leydig细胞都有不同程度的聚集。3.DEHP中高剂量组和DES组血液睾酮水平(T)均减少且和对照组比较均有统计学差异。(P<0.05)。4.DEHP和DES都会影响SD大鼠的雄激素形成通路中的关键酶P450scc,3β-HSD和Star基因表达,DEHP及DES引起P450scc,3β-HSD酶基因表达下调,DEHP引起Star酶基因表达上调。5.DEHP和DES引致子代SD雄鼠隐睾的机制可能是通过影响睾酮合成关健酶P450scc,3β-HSD和Star基因表达,进一步影响睾酮的合成,从而导致睾丸下降障碍的机理。
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