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目的:建立一种高特异性及高灵敏度的乙肝病毒共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA，cccDNA)的定量检测新方法。 方法:首先采用Hirt法提取体外培养细胞内去蛋白DNA（protein-free DNA，PF DNA），予PSAD处理高效降解其中去蛋白dslDNA，再引入嵌合引物进行特异性延伸cccDNA，然后纯化并定量检测该带外源序列的单链产物。由嵌合引物延伸所得的带外源序列单链产物在数量上与cccDNA存在一定的线性关系，通过多次重复模拟检测来确立带外源序列单链产物测得值与cccDNA实际值之间数学关系，最终实现cccDNA定量检测。 结果:未经PSAD处理的HBV核心颗粒能被嵌合引物延伸产生非特异性;通过PSAD处理能高效地降解dslDNA，使其降低3-4 log;建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR体系，用于定量检测带外源序列的单链产物;通过多次重复模拟检测，不但基本确立了带外源序列单链产物测得值与cccDNA实际值之间数学关系，成功实现cccDNA的定量检测，并且显示了该检测方法良好的重复性及稳定性，且灵敏度低至103 copies/ul;通过与Southern Blot半定量检测cccDNA对比，充分证实该定量检测方法的准确性及可靠性。 结论:成功地建立了一种HBV cccDNA定量检测的新方法，该方法结合Hirt提取法、PSAD处理、嵌合引物及实时荧光定量PCR，能快速、准确地定量检测HBV cccDNA。