梅花鹿茸质量生物评价方法及钙磷含量的相关性分析研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xivi1848
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动物类中药是我国中药宝库中极具特色的一部分,其临床疗效显著,但却普遍存在药效成分不明确的特点。现有的关于动物类中药的质量控制和评价方法远落后于植物药,且难以有效地反映其有效性及安全性,严重的制约了动物类中药的应用与发展。本研究以传统功效卓著、临床疗效确切但有效物质尚不明确的梅花鹿茸为研究对象,进行了与其传统功效补肾阳、益精血、强筋骨密切相关的睾丸间质细胞(TM3)增殖活性、乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制活性、成骨细胞(MC3T3-E1)增殖活性的体外活性研究并考察不同规格及部位的梅花鹿茸体外抑制AchE活性及其对MC3T3-E1和TM3细胞增殖能力的影响,进而筛选并建立不同规格、不同部位梅花鹿茸的生物效价评价方法。同时,测定了不同规格及部位的钙、磷含量,运用SAS软件数学统计分析程序,探讨不同规格及不同部位的梅花鹿茸体外生物活性与钙、磷含量的相关性,以期建立梅花鹿茸质量评定的量化指标。最后,进行HPLC测定,建立梅花鹿茸HPLC特征图谱,将共有峰与三种活性进行灰色关联分析。主要研究结果如下:(1)对不同规格样品的效价测定,初步可以评估和区分不同规格梅花鹿茸的质量。采用Ellman法,检测梅花鹿茸水提取物对乙酰胆碱酯酶的抑制作用。水提物浓度为25μg·mL-1时抑制效果最显著(P<0.01)。结果表明梅花鹿茸具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其所得数据用于进一步的的活性相关性研究。(2)通过研究不同规格及不同部位的梅花鹿茸对MC3T3-E1和TM3细胞增殖能力的影响,为检测梅花鹿茸益筋骨、补肾阳传统功效的细胞活性提供了依据。采用CCK-8法测定梅花鹿茸水提取物对MC3T3-E1和TM3两种细胞增殖的影响。水提物浓度为5 mg·mL-1和10 mg·mL-1时促细胞增殖效果显著(P<0.01)。结果表明梅花鹿茸具有较好的促进MC3T3-E1和TM3细胞增殖活性,其所得数据用于进一步的的活性相关性研究。(3)采用分光光度法和原子吸收光谱法,以不同规格及不同部位的梅花鹿茸为研究对象,测定钙、磷的含量,研究表明,钙、磷含量在鹿茸中的分布具有规律性,同一规格的鹿茸,下段的钙、磷含量最高,中段次之,上段最低(P<0.01);三杈茸的钙、磷含量高于二杠茸的钙、磷含量(P<0.05),二茬二杠钙、磷含量高于头茬二杠含量(P<0.05)。所得数据用于进一步的活性关联分析。(4)采用SAS软件对梅花鹿茸对乙酰胆碱酯酶的抑制活性及对MC3T3-E1和TM3增殖能力的影响与钙、磷含量之间进行了相关性研究,结果表明钙、磷的含量变化与鹿茸促骨细胞增殖作用呈极显著的正相关(P<0.01),钙、磷的含量变化与梅花鹿茸促睾丸间质细胞增殖作用呈极显著的正相关(P<0.01),钙、磷的含量变化与梅花鹿茸乙酰胆碱酯酶的作用呈极显著的负相关(P<0.01)。提示了钙、磷可以作为鹿茸等级评价的间接量化指标。(5)通过灰色关联相关性分析结果可知,梅花鹿茸共有峰与促成骨细胞增殖活性均有不同程度的相关性,灰色关联度排序为:色谱峰2>色谱峰4>色谱峰5>色谱峰7>色谱峰3>色谱峰1>色谱峰6>色谱峰9>色谱峰8>色谱峰10;梅花鹿茸共有峰与促睾丸间质细胞增殖活性均有不同程度的相关性,灰色关联度排序为:色谱峰2>色谱峰6>色谱峰1>色谱峰5>色谱峰4>色谱峰3>色谱峰7>色谱峰9>色谱峰8>色谱峰10;梅花鹿茸共有峰与乙酰胆碱酯酶抑制活性均有不同程度的相关性,灰色关联度排序为:色谱峰7>色谱峰2>色谱峰10>色谱峰8>色谱峰9>色谱峰4>色谱峰1>色谱峰3>色谱峰5>色谱峰6。
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