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红曲是红曲霉（Monascus spp. ）发酵大米等淀粉类基质的产品，在我国有上千年的应用历史，并远销日本及欧美各地。然而，1995年法国Blanc等发现红曲中含有真菌毒素桔霉素，从而使红曲的安全性受到国际社会的广泛关注，控制红曲中桔霉素的含量成为当今红曲的研究热点之一。本课题以农杆菌介导的转化法建立了红曲霉T-DNA插入突变体库，采用抑菌圈法和HPLC法筛选桔霉素突变子，通过TAIL-PCR技术获得了T-DNA侧翼未知序列，为进一步研究产桔霉素相关基因奠定了基础。主要研究结果如下： 1．采用农杆菌介导法转化红色红曲霉（Monascus ruber）M-7，建立了含有5，000多个转化子的转化库。转化条件如下：红曲霉于PDA培养基上30℃培养20d，孢子浓度为106个／mL，农杆菌的浓度OD600为0.5，诱导剂AS浓度为0.8mmol／L，农杆菌与红曲霉孢子混合液于30℃共培养3d。 2．转化子接到PDA培养基上30℃培养7d，获得了40株在菌落颜色、形态、生长速度、气生菌丝数量和产孢子能力等方面发生了显著变化的突变子。 3．建立了桔霉素的高效液相色谱（HPLC）分析。色谱条件为：chromasil C18（5μm，250×4.6mm）色谱柱，乙腈／水=50／50流动相（用磷酸调pH2.5），流速1.0mL／min，柱温为室温，进样量10μL。荧光检测器，检测波长λex=325nm，λem=512nm。该方法在0.05～50μg／mL范围对桔霉素的检测有良好线性关系，相对标准偏差和平均回收率分别为1.13％和95.77％。 4．将PDA上30℃培养6d的红曲霉菌块接种于涂有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的PDA培养基上，30℃培养2d测量抑菌圈大小。同时用HPLC检测菌块中桔霉素的含量，发现抑菌圈的大小与桔霉素含量有一定的关系，抑菌圈小的转化子桔霉素含量也低，抑菌圈大的转化子桔霉素含量有高有低，这可能和红曲霉能产生除桔霉素外的其他抑菌物质有关。但是抑菌圈法作为桔霉素突变子的一种初筛方法是可行的。 5．以抑菌圈法为初筛手段，HPLC为复筛方法，从5，000多株转化子中挑选出53株桔霉素突变子。将这些突变子制成红曲后，测定色价和桔霉素含量，挑选出8株色素和桔霉素都降低，7株色素和桔霉素都升高，2株色素降低而桔霉素升高，2株色素升高而桔霉素降低共19株突变子进行进一步的分子生物学研究。