玉米胚芽ACE抑制肽超声辅助酶解和酶膜耦合制备技术研究

来源 :江苏大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:ylh644894056
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为了充分利用玉米胚芽粕的蛋白资源,首先进行超声预处理辅助酶解玉米胚芽蛋白制备ACE抑制肽的研究,优化了超声模式、参数和酶解条件。酶解液经过膜分离得到多肽和可溶蛋白,在不补料酶膜耦合工艺的基础上,通过梯度稀释补料酶膜耦合酶解可溶蛋白制备玉米胚芽肽,并与等浓度补料酶膜耦合模式比较酶解效果。最后,将制备的玉米胚芽肽进行动物试验,研究其体内降血压效果。主要研究内容和结论如下:(1)超声辅助酶解玉米胚芽蛋白制备ACE抑制肽的研究。以蛋白转化率和高活性肽占比为指标,选择超声工作模式为20/40 kHz交替双频聚能式超声,通过单因素逐步优化实验,确定超声工作参数为功率密度100 W/L,底物浓度8%(w/v),超声处理时间20 min,超声温度30℃;超声后碱性蛋白酶酶解参数为加酶量2000 U/g,酶解时间2.5 h。在最优条件下,蛋白转化率为85.00%,300-3000 Da高活性肽占比为29.63%。相比于未超声组,蛋白转化率和高活性肽占比分别提高16.42%和13.96%;与超声洗槽组对比,蛋白转化率和高活性肽占比分别提高8.47%和10.60%。这表明双频超声辅助酶解法能有效提高玉米胚芽蛋白的酶解效率。(2)梯度稀释补料酶膜耦合制备玉米胚芽肽的研究。选择3 kDa超滤膜,以蛋白转化率为指标,优化得到不补料酶膜耦合的最优参数:中性蛋白酶,运行时间50 min,蛋白浓度1.5%,加酶量2000 U/g,出肽速率6 m L/min,此时蛋白转化率为53.57%。在此条件下,以蛋白转化率和跨膜压力为指标,研究梯度稀释补料酶膜耦合模式的最优运行时间,结果能稳定运行660 min,蛋白转化率81.94%。与等浓度补料相比,梯度稀释补料模式的运行时间是其1.57倍,蛋白转化率提高74.16%,多肽得率提高58.44%,生产效率提高29.14%,产物多肽IC50值(抑制50%ACE酶活所需的多肽浓度)降低了11.70%。研究表明梯度稀释补料酶膜耦合具有运行时间长、蛋白酶的利用率高、产物得率高、产物活性高等优点。(3)玉米胚芽肽的SHR大鼠体内降血压试验。玉米胚芽肽降压平稳,持续时间长,一次性灌胃后6 h收缩压达到最大降幅18.22 mmHg,9 h仍有较好的活性;而卡托普利降压迅速、持续时间短,6 h后血压回升较快。长期灌胃中,高剂量玉米胚芽肽在第二周收缩压达到最大降幅28.6 mm Hg,降压效果显著。血清生化试验结果表明,玉米胚芽肽主要通过降低SHR肾脏、肺和心脏中ACE的活性,降低血清中肾素、血管紧张素II和内皮素1的含量和升高NO、前列环素的含量而达到降血压效果。在降压的同时,玉米胚芽肽不会损害机体和器官的健康。
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