β-聚苹果酸发酵条件的优化及其在微胶囊制备中的应用

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β-聚苹果酸(β-poly malic acid, PMA)是一种新型的高分子生物材料,能够通过生物合成方法制备得到较高分子的聚合体。目前,国内外主要是通过化学合成法制备,因其分子量小在应用方面受到限制,生物合成制备β-聚苹果酸成为现今研究的热点。本课题利用出芽短梗霉进行发酵制得,并对其发酵条件进行了优化,在原有的基础上提高了p-聚苹果酸的产量。通过单因素和响应面设计对碳源、氮源、碳酸钙等进行了优化,得出最优的发酵条件为:葡萄糖120g/L,丁二酸铵3.02g/L,碳酸钙29.69g/L,pH4.69,此时p-聚苹果酸的产量达到18.25g/L,相对于优化前产量提高88.3%。本文以壳聚糖、p-聚苹果酸作为壁材,用复凝聚法对晚香玉香精进行包埋,通过Plackett-Burman (PB)实验设计对香精微胶囊中相关因素进行评价,筛选出有显著影响效应的因素,得出有显著影响的因素为壳聚糖浓度、聚苹果酸的pH、转速、反应时间。通过响应面确定了制备缓释型香精微胶囊的最佳工艺条件:壳聚糖1.5g/L、乳化时间45min、转速600r/min、反应时间30min、β-聚苹果酸1.0g/L、β-聚苹果酸(mL):壳聚糖(mL)=1:2、pH值为6、滴加速度为7.5mL/h、芯材添加量为1mL,借助扫描电镜观察与壁材形成的微球形微胶囊,粒径为481.0nm,包埋率为28.57%,缓释效果持续长久。本文研究了以β-聚苹果酸和壳聚糖为囊材,以硝苯地平(Nifedipine, NF)为囊芯,采用复凝聚(complex coacervation)法制备微胶囊。利用Plackett-Burman实验设计对复凝聚体系形成条件进行了初步的筛选,在此基础上,利用响应面设计深入研究了影响微胶囊粒径和多分散系数(polydipersity, Pdl)的各种因素,获得适宜的制备工艺条件,即β-聚苹果酸1.0g/L、壳聚糖0.5g/L、β-聚苹果酸与壳聚糖溶液的体积比为2:1、壳聚糖的pH值为4.0、硝苯地平溶液的浓度为1.0g/L、硝苯地平的添加量为3.0mL、p-聚苹果酸溶液的滴加速度为5.0mL/h、搅拌速度为600r/min、体系反应时间为45min,所得微胶囊的平均粒径525.6nm,多分散系数为0.186,包埋率达到43.0%。本课题以β-聚苹果酸和明胶为壁材,使用复凝聚法制备空心微胶囊,探寻制备粒径均匀,分散度(PdⅠ)较小的微胶囊的条件。在预实验的基础上,根据Plackett-Burman设计,考察β-聚苹果酸浓度、明胶浓度、明胶pH值、滴速、转速和反应时间六个因素对微胶囊粒径和PdⅠ的影响程度,得出滴速和转速对粒径有显著影响,明胶浓度对PdⅠ有显著影响。后根据Box-Behnken设计原理,在Plackett-Burman实验的基础上采用响应面分析法,建立了得到较小粒径和PdⅠ微胶囊的二次多项数学模型,并分别以粒径和PdⅠ为响应值,考察了PMA浓度、明胶浓度、明胶pH值和反应时间及它们之间的交互作用对响应值的影响。最优组合为:PMA浓度0.14%,明胶浓度0.16%,明胶pH值为4.11,反应时间38.69min,可以得到粒径为275.73nm,PdⅠ为0.309的微胶囊。
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