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研究背景：米非司酮(mifepristone, RU486)是人类合成的一种19-去甲基类固醇,主要在受体水平上发挥作用。米非司酮是第一个用于临床的孕激素受体拮抗剂,目前已广泛应用于抗早孕。20世纪90年代,国内外均有报道米非司酮广泛用于临床紧急避孕,且用药剂量在逐步减少。近年来,研究发现每日给予低剂量米非司酮,能阻止内膜发育而起避孕作用,即所谓的“内膜避孕”,对月经周期影响小,无明显副作用。体外子宫内膜培养研究发现,米非司酮可以影响子宫内膜的容受性,从而降低妊娠率。然而,低剂量米非司酮抗着床避孕作用机制仍不完全清楚。正常的妊娠过程中,子宫内膜的容受性对妊娠的建立具有至关重要的作用。子宫内膜组织仅在极短暂的时间内对植入的胚胎表现为容受性,而在这个时间以外则排斥胚胎的植入,这个关键而短暂的时期被称之为“植入窗”期,即月经周期第20-24天,并且以某些子宫内膜生长因子、细胞因子、黏附分子的上调为特征。其中,血管生成是胚胎着床的关键步骤。正常月经周期中子宫动脉及螺旋动脉受卵巢激素调节,血流呈周期性变化,子宫内膜间质水肿亦产生周期性变化。在胚胎即将着床时,子官内膜血管增生、迂曲,间质明显水肿疏松,但其变化机制尚不能完全明确。成功的植入有赖于子宫内膜和胚胎的同步发育,甚至一个微小的紊乱或失调都会阻止植入的发生。因此,植入窗期子宫内膜间质血管生成及水肿变化将直接影响子宫内膜的容受性。水通道蛋白1 (aquaporin-1, AQP1)是唯一表达在内皮细胞上的水通道蛋白,负责内皮细胞跨膜和跨细胞高效水转运,其不仅存在于分泌及吸收上皮细胞中而且在子宫内膜间质的毛细血管及小血管的内皮细胞有高表达,对血管生成及血管内皮细胞的渗透性具有调节作用。本文利用体外培养系统,免疫组化及RT-PCR法研究低剂量米非司酮对人植入窗期子宫内膜AQP1表达的影响；利用倒置显微镜、MTT法检测低剂量米非司酮对子宫内膜微血管密度(microvessel density, MVD)及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)增殖的影响以探讨低剂量米非司酮抗着床避孕作用的相关机制。材料与方法：收集因输卵管切除或丈夫不育,行IVF-ET妇女的子宫内膜。入选妇女月经史、生殖系统解剖、内分泌等指标均正常,近3个月内无激素类药物使用史,于月经周期第20至24天取内膜。每例内膜分成三等份,给予不同处理(分别为对照组,65nmol/L组,200nmol/L组),组织培养12h。HUVECs分别给予Onmol/L,65nmol/L, 200nmol/L, 1000nmol/L米非司酮处理6,12,24,48h。采用免疫组化EnVision二步法染色法及RT-PCR法检测低剂量米非司酮对植入窗期子宫内膜AQP1蛋白及mRNA;表达的影响；利用倒置显微镜检测低剂量米非司酮对子宫内膜MVD的影响；采用MTT法检测米非司酮对HUVECs增殖活性影响。结果：1.子宫内膜组织块体外培养前后形态学观察培养前后子宫内膜均处于植入窗期,腺体结构完整、血管较丰富,间质疏松水肿,各组间形态学无显著性差异。2.植入窗期子宫内膜AQP1蛋白表达的变化AQP1阳性细胞着色为棕黄色,阳性细胞主要分布在血管内皮细胞表面。三组内膜AQP1蛋白表达分别为：对照组1.6±±0.3,65nmol/L组2.1±0.1,200nmol/L组2.6±0.4。两实验组分别与对照组相比,显著增高(P<0.05)；两实验组之间有显著差异(P<0.05)。3.植入窗期子宫内膜AQPlmRNA表达的变化三组子宫内膜AQPlmRNA表达分别为：对照组1.08±0.18,65nmol/L组1.4±0.2,200nmol/L组1.6±±0.2。三组有显著差异(P<0.05)；两实验组分别与对照组相比,显著增高(P<0.05)；两实验组之间有显著差异(P<0.05)。4.植入窗期子宫内膜MVD的变化低剂量米非司酮作用12h后,三组子宫内膜内膜MVD分别为：对照组350±9,65nmol/L组353±5,200nmol/L组362±12。三组间MVD差异无显著性(P>0.05)5.米非司酮对HUVECs增殖活性的影响。四组(Onmol/L组,65nmol/L组,200nmol/L组,1000nmol/L组)米非司酮在不用培养时间(6,12,24,48h)对HUVECs增殖活性的影响。培养12h后,200nmol/L组及1000nmol/L组分别与对照组相比,显著增高(P<0.05),实验组1000nmol/L组与65nmol/L组之间有显著差异(P<0.05),其余各组间差别无统计学意义(P>0.05)。6.AQP1siRNA处理后米非司酮对HUVECs增殖的影响。我们选用200nmol/L, 1000nmol/L组培养12h作为标准,检测AQP1siRNA处理后低剂量米非司酮对HUVECs增殖的影响。结果显示,AQP1siRNA处理后能明显减弱米非司酮对HUVECs增殖活性的影响(P<0.05)结论：1、低剂量米非司酮能增加植入窗期AQP1蛋白及mRNA的表达,提示低剂量米非司酮可能以此破坏了植入窗期子宫内膜的容受性。2、米非司酮能明显增加HUVECs增殖活性,提示米非司酮能够影响血管生成。3、AQP1siRNA处理后能明显减弱米非司酮对HUVECs增殖活性的影响,提示AQP1参与了米非司酮对血管生成的影响。