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背景和目的胃癌是EGFR过表达的肿瘤,但目前研究显示胃癌对EGFR-TKI不敏感,可能存在酪氨酸激酶抑制剂的原发耐药。在非小细胞肺癌中非靶受体c-Met继发性过表达与吉非替尼的继发性耐药有关。c-Met过表达在胃癌中较为常见,目前有研究发现肝细胞生长因子拮抗剂NK4可以提高吉非替尼在胃癌细胞中的敏感性。提示c-Met的异常表达可能影响了胃癌对EGFR-TKIs的敏感性。本研究以EGFR与c-Met过表达且无EGFR突变的胃癌细胞株MKN-45为研究对象,探索能否通过改变胃癌细胞的c-Met基因表达状态来改变其对吉非替尼的敏感性,本研究结果可为是否采用吉非替尼与c-Met抑制剂联合治疗胃癌提供依据。材料与方法1、人胃癌细胞MKN-45获赠于中南大学湘雅医学院病理实验室,置于37℃、5%C02、湿度为80%的培养箱中用含有10%胎牛血清的DMEM(高糖)完全培养基培养。从Genebank基因数据库获得c-Met基因序列,设计3条c-Met-siRNA序列,委托上海吉玛制药技术有限公司采用化学合成法合成。2、通过脂质体LipofectaminTM2000介导,将3条c-Met-siRNA序列转入人胃癌细胞MKN-45中,并设置阴性对照组、LipofectaminTM2000组和空白对照组。3、转染48h后,利用适时定量PCR(real time-PCR, RT-PCR)方法检测转染前后胃癌MKN-45细胞c-Met基因mRNA的变化；利用Western-Blot方法检测转染前后胃癌MKN-45细胞c-Met蛋白的变化；利用AnnexinV和PI双染流式检测RNA干扰对细胞凋亡的影响。利用MTT法检测胃癌细胞MKN-45对吉非替尼的IC50。4、采用SPSS19.0统计软件包对数据进行分析,各组数据用均数±标准差表示,两组间比较采用t检验,多组间比较利用单因素ANONA分析,以P<0.05为有统计学意义。结果1、转染48h后,RT-PCR和Western-Blot方法检测转染后胃癌细胞MKN-45c-Met基因的mRNA和蛋白表达较三个对照组均明显下降(P<0.05)。2、转染后胃癌细胞MKN-45凋亡率明显增加(P<0.05)。3、转染后胃癌细胞MKN-45对吉非替尼的IC50未明显降低(P>0.05)。结论1、利用RNA干扰技术可成功下调胃癌MKN-45细胞中的c-Met基因的表达。2、胃癌细胞MKN-45转染c-Met-siRNA成功后可促进细胞凋亡。3、沉默c-Met基因未能改善胃癌细胞MKN-45对吉非替尼的敏感性。