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积雪草中的三萜皂苷具有重要的药用价值,然而由于糖苷类药物极性大,在消化道中的吸收差、生物利用度低,利用微生物酶水解糖苷键降低极性有利于提高苷类药物的生物利用度。本文对积雪草中的三萜皂苷的微生物转化进行了系统研究。通过采集不同环境的土壤样本,分离纯化得到了361株微生物,利用七叶灵显色技术初筛得到12株产β-葡萄糖苷酶能力较高的菌株,根据微生物液体发酵过程中对底物积雪草总苷的转化能力从中复筛出了1株能充分转化积雪草总苷的微生物菌株J-9。通过对菌株J-9的形态和培养特征观察,结合分子生物学方法进行18S rDNA和ITS序列的测定及同源性分析,通过BLAST比对以及系统发育分析,确定了其种属分类地位。菌种鉴定结果为:菌株J-9属于半知菌纲(Deuteromyces)、丝孢菌目(Hyphomycetales)、丛梗孢科(Moniliaceae)、青霉属(Penicillium)。运用薄层层析法鉴别积雪草总苷及其转化产物,通过对不同配比展开剂的优化比较,确定了最佳薄层层析展开剂,即氯仿:甲醇:水=10:3:0.2;利用硅胶柱层析法分离纯化得到了2个高纯度转化产物A、B。通过测定熔点(mp)、比旋度([α]D)以及高分辨质谱(HRMS)、红外光谱(IR)、核磁共振碳谱(13C-NMR)、氢谱(1H-NMR)分析,鉴定转化产物A、B的化学结构分别为积雪草单葡萄糖苷和羟基积雪草单葡萄糖苷。其中羟基积雪草单葡萄糖苷的结构为2α,3β,6β,23α-四羟基乌苏-12-烯-28-酸-O-β-D-吡喃葡萄糖酯,未见文献报道,为首次分离得到。建立了同时测定积雪草总苷转化产物积雪草单葡萄糖苷和羟基积雪草单葡萄糖苷的HPLC检测条件,色谱柱:Phenomex Luna C18柱(250mm×4.6mm,5μm );流动相:甲醇(A):水(B)=55:45;柱温:30℃;检测波长:205nm;流速:0.8ml/min;进样量20μl。其中,积雪草单葡萄糖苷和羟基积雪草单葡萄糖苷的进样量与峰面积呈良好线性关系,线性范围分别为2.05～10.26μg和2.54～12.68μg,r=0.9999和0.9998。平均加样回收率分别为101.1%和101.0%(n=6),RSD分别为1.3%和0.9%。本方法操作简便易行,重复性好,灵敏度高,为积雪草总苷的转化产物的定量分析提供了快速、准确的测定方法。