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本研究合成了玉米赤霉烯酮人工抗原ZEN-BSA,三次免疫Balb/c小鼠后,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在50%的PEG1450条件下进行融合,HAT半固体培养基培养,采用非竞争/竞争ELISA两部筛选法最终获得能够稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株3C4,对该细胞分泌的抗体进行了性质鉴定,在此基础上建立了对玉米赤霉烯酮的间接竞争ELISA检测方法,为玉米赤霉烯酮免疫分析检测技术奠定了基础。主要研究内容及结果如下：1.采用玉米赤霉烯酮(ZEN)与羧甲基羟胺半盐酸盐在吡啶中反应,生成玉米赤霉烯酮肟(ZENO),用活性酯法将ZENO与牛血清白蛋白(BSA)的氨基相连合成ZEN人工抗原：紫外-可见连续光谱扫描法鉴定人工抗原,免疫结果显示三免后小鼠效价达1：16000,考马斯亮蓝法测定ZEN与BSA偶联物的蛋白含量为1.8mg/mL,表明ZEN人工抗原合成成功。2.利用第三次免疫后小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,融合的杂交瘤细胞在HAT半固体培养基上培养,采用非竞争/竞争ELISA两部筛选法获得3株阳性细胞,并转移至HT液体培养基中进行克隆,稳定性培养后得到一株分泌特异性抗体的单克隆细胞株,命名为3C4,试剂盒鉴定抗体亚型为IgG2a;间接竞争ELISA测定抗体对ZEN的IC50值为O.37μg/L与AFG1、AFG2、 AFB1、AFB2、DON、T-2、OTA无交叉反应,说明该单克隆抗体对玉米赤霉烯酮识别具有高特异性。3.利用3C4单克隆抗体研究建立了EEN超灵敏间接竞争酶联免疫吸附分析技术(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。棋盘法确定包被抗原ZEN-BSA的浓度为0.4μg/mL.3C4单克隆抗体稀释度为1：4000,对封闭物、稀释液pH值、盐离子浓度等理化参数优化后,该方法的灵敏度为0.322μg/L±0.042μg/L,工作浓度范围为0.016μg/L-3.08μg/L。ZEN免疫检测技术的建立,为保障玉米、小麦等农产品和食品安全消费提供有力技术支撑。