【摘 要】
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本研究以猪PK-15细胞系、稳定干扰Ⅲ型干扰素（IFN-λs）的PK-15细胞系和实验猪为实验材料,分别从细胞水平和动物水平上研究宿主感染猪瘟病毒后IFN-λs的表达及其下游信号通路的活化情况。实验采用猪瘟病毒石门株感染PK-15细胞,分别感染12h、24h、36h、48h、60h后,收取细胞制备RNA样品和蛋白样品,应用RT-PCR和qRT-PCR检测细胞中IFN-λs的mRNA表达水平是否发生
【基金项目】
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国家自然科学基金（U1405216,U1305212）; 福建省引进高层次创业创新人才计划（省引才“百人计划”）
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本研究以猪PK-15细胞系、稳定干扰Ⅲ型干扰素（IFN-λs）的PK-15细胞系和实验猪为实验材料,分别从细胞水平和动物水平上研究宿主感染猪瘟病毒后IFN-λs的表达及其下游信号通路的活化情况。实验采用猪瘟病毒石门株感染PK-15细胞,分别感染12h、24h、36h、48h、60h后,收取细胞制备RNA样品和蛋白样品,应用RT-PCR和qRT-PCR检测细胞中IFN-λs的mRNA表达水平是否发生变化,进而通过Western blotting检测细胞中STAT1蛋白磷酸化水平的变化情况;采用猪瘟病毒石门株颈部肌肉注射感染实验猪,感染5d后通过RT-PCR、qRT-PCR和ELISA方法检测其脾脏、颌下淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结和扁桃体淋巴结中IFN-λs的mRNA及其蛋白表达水平,通过Western blotting检测上述组织中STAT1蛋白的磷酸化水平。同时,对在抗病毒感染中起关键作用的几种重要的干扰素刺激基因ISGs进行了检测。实验结果如下:1)猪瘟病毒感染PK-15细胞不同时间点后,RT-PCR,qRT-PCR检测IFN-λs的mRNA表达水平,感染早期随着时间的延长呈逐渐上升的趋势,48 h以后其mRNA的水平有下降趋势。2)猪感染猪瘟病毒后,其脾脏、颌下淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体淋巴结等免疫器官中IFN-λs的mRNA表达水平明显比对照猪的高。3)测定猪瘟病毒感染干扰IFN-λs PK-15细胞后猪瘟病毒的复制情况,结果显示干扰IFN-λ1后猪瘟病毒复制能力增强。4)猪瘟病毒感染PK-15细胞和猪后,JAK-STAT信号通路中的STAT1磷酸化水平不论在细胞水平还是动物水平上都得到加强。在动物水平上,JAK-STAT信号通路下游的ISGs在mRNA和蛋白表达水平上都比不感染猪的高。上述研究表明,猪瘟病毒感染无论在细胞水平还是在动物水平上都能刺激Ⅲ型干扰素的表达,激活细胞因子的JAK-STAT信号通路,从动物水平上诱导关键ISGs的产生,这些结果提示,猪瘟病毒感染可能会诱导宿主产生有效的Ⅲ型干扰素介导的天然免疫应答。
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