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目的：探讨前软骨干细胞(PSCs)分离纯化的方法,复合构建新型的自组装多肽纳米凝胶组织工程支架,研究支架材料的细胞相容性及前软骨干细胞在支架中的增殖和软骨分化情况。 方法：免疫磁珠细胞分选系统分离纯化前软骨干细胞,利用免疫荧光染色法及免疫组化染色鉴定纯化后的PSCs,利用固相合成法将含2单位RGD序列的短肽PRG与KLD-12多肽的C末端相连,复合构建新型的自组装多肽纳米凝胶组织工程支架RGDmx,将纯化后的前软骨干细胞作为种子细胞分别接种至KLD-12自组装多肽凝胶支架(对照组)和RGDmx自组装多肽凝胶支架(实验组)中进行三维培养,对比观察两组支架中PSCs生长情况,用CCK-8法进行细胞增殖-毒性检测并测定不同混合比状态下的自组装多肽凝胶支架对PSCs增殖的影响,用含TGF-β3的完全软骨形成培养液(CCM)诱导两组PSCs向软骨细胞特性方向分化,利用RT-PCR法对比检测两组支架内PSCs向软骨细胞特性方向分化过程中特异性细胞外基质CollagenⅡ和Aggrecan的表达情况。 结果：利用免疫磁珠分选系统分离纯化获得了高纯度FGFR-3表达阳性细胞,免疫组化染色法和免疫荧光法鉴定证实为PSCs。CCK-8检测结果表明实验组细胞A值随培养时间的延长而逐步提高,在第7d左右时达到峰值,第7d、14d时实验组细胞A值较对照组高,其差异有统计学意义(P<0.05),并且在复合培养第7d时,混合比为40％左右的RGDmx自组装多肽凝胶支架中细胞A值最高,其差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果表明在复合诱导培养14d后,实验组中的细胞CollagenⅡ和AggrecanmRNA的表达水平较均对照组高,其差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：成功分离纯化获得PSCs,RGDmx自组装多肽凝胶支架有着良好的细胞相容性,能够有效的促进PSCs的增殖、PSCs向软骨细胞特性分化及细胞外基质的合成和分泌,是组织工程较理想的细胞载体系统,PSCs与自组装多肽纳米凝胶RGDmx复合物有望构建组织工程化软骨及修复关节软骨缺损。