Rab19的亚细胞定位及功能研究

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Rab/Ypt/Sec4家族是RasGTPase超家族中最大的一个亚家族。其中Rab蛋白在囊泡运输的过程中发挥着重要的作用,通过结合GTP或GDP的转换发挥分子开关的作用,可以通过结合GTP或GDP发挥特定的生理学功能,精细调控囊泡转运的各个方面,Rab19蛋白是Rab家族中的一员,目前小分子GTPaseRab19的性质和功能还未被详细研究。本文拟探讨Rab19的亚细胞定位及其细胞生物学功能。我们通过RT-PCR发现,Rab19在人类组织:胰腺、肾脏、脑、肝脏、心脏中特异性表达而在小鼠组织中均有表达,通过在动物细胞中过表达GFP-Rab19利用免疫荧光显微技术发现其主要与高尔基体标志蛋白GM130、TGN38(鼠)/TGN46(人)共定位,不与早期内体标志蛋白EEA1共定位,表明Rab19主要分布在高尔基体。为了研究Rab19的细胞生物学功能,我们构建了失活型Rab19T31N和激活型Rab1 9Q76L突变体利用GFP-VSVG蛋白作为示踪标志物,研究发现过表达Rab19T31N失活型突变体影响VSVG从高尔基体到胞膜的正向运输途径。为了进一步研究Rab19对分泌的影响我们在动物细胞内过表达Rab19失活型和激活型的突变体通过收集胞内和胞外的Cathepsind(CTSD)用WB技术检测发现,过表达Rab1 9对CTSD的运输并无显著影响。我们的研究结果表明Rab19定位于高尔基体,并可能特异性的介导VSVG从高尔基体到胞外的运输,最后我们通过Large scale pull down寻找Rab19的相互作用蛋白,为今后的生物学功能和分子机制的研究奠定基础。
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